将某外源基因与质粒结合形成重组质粒的过程如图所示，BamHⅠ是一种限制酶，其识别序列和切割位点是5'-G↓GATCC-3'。下列叙述错误的是（）

1. 将某外源基因与质粒结合形成重组质粒的过程如图所示，BamHⅠ是一种限制酶，其识别序列和切割位点是5'-G↓GATCC-3'。下列叙述错误的是（）

A. 使用限制酶BamHⅠ切割目的基因和质粒后可形成平末端 B. 重组质粒构建过程中，需要BamHⅠ酶和DNA聚合酶参与 C. 若用两种识别序列不同的限制酶同时切割目的基因和质粒，则可提高重组质粒构建的成功率 D. BamHⅠ切割DNA产生的末端不能用E.coli DNA连接酶连接形成磷酸二酯键

【考点】

基因工程的基本工具（详细）;

【答案】

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1. 限制酶和DNA连接酶是基因工程的工具酶，以下说法正确的是（　　）

A. DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键 B. 限制酶只能切割双链DNA片段，不能切割烟草花叶病毒的核酸 C. E.coliDNA连接酶既能连接黏性末端，也能连接平末端 D. 限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，不能剪切自身的DNA

多选题容易

2. 下列关于限制酶和 DNA 连接酶的理解，错误的是（）

A. 限制酶能在特定部位的两个核苷酸之间切断磷酸二酯键 B. DNA 连接酶可以恢复 DNA 分子中的氢键，将两条 DNA 片段的黏性末端之间的缝隙连接起来 C. 在基因工程操作中，可以用 DNA 聚合酶代替 DNA 连接酶 D. 限制酶广泛存在于动植物体内，微生物内很少分布

多选题容易

3. 利用基因工程可以赋予生物新的遗传特性，下列说法正确的是（）

A. 基因工程实现的原因之一是不同生物的DNA结构相同 B. 基因工程中的“分子工具”指的是限制酶、DNA聚合酶 C. 基因工程可以按照人们的愿望定向改造生物 D. 基因工程中使用的限制酶主要来自于原核生物

多选题容易

1. 下图表示4种限制酶的识别序列和切割位点。下列叙述错误的是（）

A. 四种限制酶都能切断特定核苷酸序列中每条链特定部位的磷酸二酯键和链间氢键 B. 分别经BglⅡ和BamHⅠ切割的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接 C. 分别经SmaⅠ和EcoRV切割的DNA片段用DNA连接酶连接的效率较低 D. 分别经BglⅡ和BamHI切割后再连接的DNA片段仍能被这两种限制酶切割

多选题普通

2. 某小组用限制酶处理DNA后获得了如图所示的3种黏性末端。下列相关叙述错误的是（）

A. 限制酶的识别序列都是由6个核苷酸组成的 B. 这3种黏性末端都是由同种限制酶切割获得的 C. T4DNA连接酶不能连接互补的黏性末端 D. E．coli DNA连接酶可以将甲、乙连接起来

多选题普通

3. 被限制酶错位切开的DNA 两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们正好碱基互补配对，这样的切口叫黏性末端。如图①~⑥是多种限制酶识别序列及切割位点示意图。据图分析，下列叙述正确的是（）

A. 不同的限制酶可能识别相同的DNA 序列，切割产生不同的黏性末端 B. 不同的限制酶可能识别不同的DNA 序列，切割产生相同的黏性末端 C. 不同的限制酶可能识别相同的DNA 序列，切割产生相同的黏性末端 D. 限制酶只能识别“其中一条链上按5'到3'读取的序列与其互补链上按相同的5'到3'读取的序列一致”的回文序列

多选题普通

1. 甲、乙、丙三种限制酶均识别6个核苷酸序列，下列有关如图所示的黏性末端的说法，错误的是（　　）

A. 甲、乙、丙黏性末端分别是由不同的限制酶切割产生的 B. 甲、乙具有相同的黏性末端，可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能 C. DNA连接酶的作用位点是b处 D. 限制酶主要从原核生物中提取

单选题普通

2. 4种限制酶的识别序列和切割位点如表所示。下列叙述错误的是（）

限制酶	BamHI	EcoRI	MfeI	HindⅢ
识别序列和切割位点	5'-G↓GATCC-3'	5'-G↓AATTC-3'	5'-C↓AATTG-3'	5'-A↓AGCTT-3'

A. 该4种限制酶识别序列都是由6个脱氧核苷酸组成 B. 该4种限制酶切割产生的DNA片段均为黏性末端 C. 该4种限制酶切割产生的DNA都不能相互连接 D. 该4种限制酶都在两条链中特定部位断裂磷酸二酯键

单选题普通

3. 下列关于基因工程中基本工具的叙述，正确的是（）

A. 所有 DNA 经限制酶切割后都形成黏性末端 B. 载体可以在受体细胞内复制或整合到受体细胞的染色体DNA上，随受体复制 C. 限制酶的作用部位是 DNA 分子中特定的两个核苷酸之间的氢键 D. DNA 聚合酶能催化磷酸二酯键的形成，可代替 DNA 连接酶

单选题普通

1. 我国玉米的生产一直受到虫害的严重影响，其中鳞翅目害虫亚洲玉米螟对我国玉米生产的危害较为显著。通过基因工程育种，将抗虫基因crylAb13转入玉米，能够显著提高玉米对玉米螟的抗性。过程如图1所示，其中基因Bar为抗除草剂基因。回答下列问题：

(1) 根据基因表达载体的结构推测，抗除草剂基因Bar的作用是。基因cry1Ab13必须插入Ti质粒的T-DNA中，原因是。

(2) 为了减少限制酶识别序列的影响，研究人员利用无缝克隆In=Fusion技术实现过程②目的。原理如图2所示。利用限制酶将表达载体线性化。过程①利用技术获取基因crylAb13，该过程中要在引物1和引物2的（填“3＇”或“5＇”）端增加对应表达载体中的片段。将线性化的表达载体和基因cry1Ab13混合进行In-Fusion反应，获得重组表达载体。

(3) 过程③利用构建好的重组表达载体转化经处理过的农杆菌，然后侵染玉米愈伤组织，进而获得转基因玉米植株。研究人员探究了农杆菌浓度对基因转化效率的影响，结果如图3所示。实验结果表明，转化效率较高的农杆菌浓度范围为OD600。为了进一步对侵染条件进行优化，可进行实验探究的课题是。

综合题普通

2. 巴斯德毕赤酵母以甲醇作为唯一碳源，不能合成组氨酸。科研人员利用巴斯德毕赤酵母、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、含有组氨酸合成基因的质粒生产转基因重组酵母乙肝疫苗。HBsAg基因上的两个限制酶切割位点如图1所示。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术扩增HBsAg基因的原理是。设计引物是PCR技术中至关重要的一环，图2中，引物Ⅰ、引物Ⅱ中有一个设计不合理，请指出并说明原因：。

(2) 研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为

，用限制酶Sma Ⅰ切出的末端Ⅱ为

，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点：、。HBsAg基因转录时以图1中α链为模板链，则插入质粒时，酶切位点（填“1”或“2”）离启动子更近，原因是。

(3) 筛选成功导入重组质粒的巴斯德毕赤酵母并观察菌落的形态，所用培养基的特点为。

综合题普通

3. 抗体分子含有两条短肽链和两条长肽链，科研人员将小鼠编码抗体（抗禽流感病毒HA抗原）可变区的基因片段与人编码抗体恒定区的基因片段整合，构建图1所示表达载体（HindⅢ等表示不同限制酶的切割位点，EcoRⅤ的识别序列和切割位点是GAT↓ATC），导入中国仓鼠卵巢细胞后，筛选能够稳定表达的细胞株，成功获得大量嵌合抗体（图2），嵌合抗体因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。请根据资料回答下列问题：

(1) 为构建人鼠嵌合抗体基因表达载体，需要对编码抗体不同片段的基因进行重组，为此需从分泌鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取鼠抗体mRNA，经逆转录得到鼠抗体cDNA用于PCR技术扩增，并分别与人抗体的拼接。

(2) 在PCR反应体系中需加入模板、4种脱氧核苷酸、等（至少答两个）。

(3) 图中①是识别和结合的部位。构建该基因表达载体时，先将人抗体的长链、短链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游，这一过程需要用到多种限制酶，如获得鼠抗体长链可变区基因用酶切；图中⑤和⑥用连接酶连接。

(4) 通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体，提高了疗效，推测该嵌合抗体的优点是。

综合题普通

1. 限制性内切酶EcoRI识别并切割

双链DNA，用EcoRI完全酶切果蝇基因组DNA，理论上得到DNA片段的平均长度（碱基对）约为（）

A. 6 B. 250 C. 4000 D. 24000

单选题普通

2. 下列有关病毒在生物学和医学领域应用的叙述，错误的是（　　）

A. 灭活的病毒可用于诱导动物细胞融合 B. 用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体 C. 基因工程中常用噬菌体转化植物细胞 D. 经灭活或减毒处理的病毒可用于免疫预防

单选题普通

3. 用Xho I和Sal I两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（）

A. 图1中两种酶识别的核苷酸序列不同 B. 图2中酶切产物可用于构建重组DNA C. 泳道①中是用Sal I处理得到的酶切产物 D. 图中被酶切的DNA片段是单链DNA

单选题普通