1.

A型塞内卡病毒(SVA)会导致猪患水疱传染病,症状与猪口蹄疫等传染病非常相似,增加了临床鉴别诊断的难度,研究人员尝试开发一种快速、准确检测SVA病毒的方法。已知VP1蛋白是SVA核衣壳的主要成分,可作为SVA诊断的靶蛋白。

(1)用纯化的VP1多次免疫小鼠,然后诱导小鼠的________融合,常用方法有PEG融合法、电融合法和________。通过选择培养的方法筛选出杂交瘤细胞,再经过96孔板克隆化培养和抗体检测筛选出能够________的杂交瘤细胞。将筛选到的2个杂交瘤细胞株分别注射到小鼠腹腔中,从腹水中成功提取得到了2种鼠源单克隆抗体——2E10和3E4。

为进一步确定2E10和3E4在VP1上的结合位点,将VP1蛋白截为4段(VP1-1~VP1-4),电泳后分别用2E10和3E4为探针进行杂交,结果如图所示。

(2)根据实验结果,可判断2E10和3E4与VP1的结合位点是________(填“相同”或“不同”)的,依据是________。

用SVA感染小鼠肾脏细胞后,37℃培养24小时,去垢剂处理增加细胞膜的通透性,将处理后的细胞分为两组,固定在介质上,分别加入2E10和3E4,一段时间后冲洗掉未结合的抗体,然后依次加入酶标抗体和底物,酶标抗体与鼠源抗体结合后可催化底物发出绿色荧光。

(3)对照组应选择________细胞,其余处理与实验组一致。

(4)如果实验结果为______,则证明制备的单克隆抗体具有特异性。

A. 对照组细胞均出现绿色荧光,实验组细胞均无绿色荧光
B. 对照组细胞均无绿色荧光,实验组细胞均出现绿色荧光
C. 对照组细胞均无绿色荧光,实验组细胞也无绿色荧光
D. 对照组细胞出现绿色荧光,实验组细胞出现绿色荧光

用获得的2种单克隆抗体制作快速检测SVA病毒的试纸条,如下图所示。当待测样品滴入样品垫后会沿着试纸条向右扩散,结合垫处含有过量胶体金标记的2E10,也可向右扩散,当胶体金颗粒聚集时才会出现可见条带,检测线、质控线处包埋固定的抗体依次是3E4和山羊抗鼠IgG(可特异性结合各种鼠源抗体)。

(5)在检测过程中,试纸上可发生待测病毒抗原与抗体结合的区域是________。病毒检测阳性的结果为检测线和质控线处均出现条带,请解释条带形成的原因________。

【考点】
体液免疫;
【答案】

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1. HCV是有包膜的单股正链RNA(+RNA)病毒,主要经血液或血制品传播。下图示HCV生活史,据图回答下列问题:

(1) 据图可知,HCV识别肝细胞表面的受体,通过作用入侵或感染宿主细胞。
(2) 人体被HCV感染后,可通过体液免疫阻止HCV在内环境中散播,该过程属于人体的第道防线。在体液免疫过程中,B淋巴细胞识别HCV作为其活化的第一信号,细胞与B细胞结合,为其提供第二信号和细胞因子,B细胞才能增殖分化为浆细胞,产生发挥免疫效应。
(3) 当HCV感染进入慢性期后,尽早检测确诊是防治的关键。受检者体内的(填两种)可作为诊断的依据。若受检者血清中持续检测不到,则可以认为患者已经痊愈。
(4) 谷丙转氨酶主要存在于肝细胞内,血清中谷丙转氨酶的含量可作为检测肝脏细胞损伤程度的指标。肝脏是特殊的免疫耐受器官。乙肝病毒携带者肝脏中的T细胞表面存在高表达抑制性受体TIGIT,其与肝脏表面某信号分子结合后,会抑制T细胞活性,使肝脏处于免疫耐受状态。为研究TIGIT阻断后对小鼠肝脏免疫耐受的影响,研究人员检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)的含量,结果如图。

实验结果显示,第3组小鼠ALT的含量稍高于野生型小鼠,但低于第4组小鼠,说明该组小鼠处于状态。实验组小鼠中,肝脏受损最严重的是第组小鼠。

实验探究题 困难