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1. 研究人员利用绿色荧光蛋白基因(sGFP)转染大丽轮枝菌,培育表达绿色荧光蛋白的转基因菌株,主要过程如图所示,a链和b链分别是相应基因转录的模板链。下列叙述正确的是( )
A.
图中b链的碱基序列黏性末端(5'→3')为TCGA
B.
BamHI和HindⅢ作用的化学键均是磷酸二酯键
C.
②中需要DNA连接酶,此时目的基因插入到构巢曲霉启动子之后
D.
③中需将导入目的基因的农杆菌置于含潮霉素的培养基上筛选
【考点】
基因工程的基本工具(详细); 基因工程的操作程序(详细);
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1. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜,培育出转基因抗病毒番木瓜,Ti质粒结构模式图如图所示。下列叙述正确的是( )
A.
农杆菌的T-DNA与番木瓜基因发生重组
B.
构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶
C.
含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性
D.
转基因抗病毒番木瓜不具有卡那霉素抗性
多选题
容易
2. 红细胞生成素(EPO)是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白,可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限,某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器,使其能合成EPO。下列叙述正确的是( )
A.
用显微注射技术将含EPO基因的表达载体导入羊的乳腺细胞中,可得到乳腺生物反应器
B.
构建基因表达载体时,需将EPO基因与乳腺蛋白基因的启动子重组在一起
C.
该转基因羊中的EPO基因可在羊的乳腺细胞中表达
D.
可通过PCR技术检测EPO基因是否插入山羊基因组
多选题
容易
3. 某研究人员欲利用核移植技术来治疗糖尿病,提出了如图所示的方案。下列相关叙述正确的是( )
A.
动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B.
图中用到了体细胞核移植技术、DNA重组技术等
C.
图中所用的去核卵母细胞一般处于减数分裂Ⅱ中期
D.
图中“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生基因突变
单选题
容易
1. LacZ基因位于大肠杆菌质粒上,其编码产物Ʋ-半乳糖苷酶在X-gal和IPTC两种物质都存在时,可使大肠杆菌菌落呈蓝色,否则菌落呈白色。相关的转基因操作如图所示,其中①②③表示有关过程。下列相关叙述错误的是( )
A.
添加X-gal和IPTC的选择培养基中,不含目的基因的菌落均呈现蓝色
B.
为防止质粒相互连接及自身环化,可用两种识别不同序列但产生相同黏性末端的同尾酶切割质粒
C.
①过程的目的是增加一段与质粒切口处相同的黏性末端片段
D.
②过程应将目的基因连接在启动子与终止子之间,启动子是DNA聚合酶识别和结合的部位
多选题
普通
2. 图1 表示 CRISPR/Cas9 基因编辑的主要作用机理,其通过gRNA 识别目的基因组靶序列来对相应基因进行剪切(Cas9 基因编码的酶能在特定的DNA序列上切割DNA)等机制从而实现对靶基因的定点突变。图2是DNA 分子中的 FANCM基因的切割位点示意图,FANCM蛋白能阻止减数分裂过程中染色体片段互换的发生。科研人员通过构建CRISPR/Cas9重组表达载体,以生菜嫩叶作为外植体,经农杆菌转化,培育出 FANCM基因的突变纯合新品种。下列叙述正确的是( )
A.
构建CRISPR/Cas9重组表达载体时主要利用的工具酶有限制酶和DNA 连接酶
B.
根据靶序列设计的gRNA中相应序列是5'-UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG-3'
C.
研究中需要将gRNA 和Cas9 基因序列均插入农杆菌 Ti质粒的T-DNA 内部
D.
获得的 FANCM 基因突变纯合体在遗传育种中的应用价值是降低基因重组率
多选题
普通
3. 如图为某种质粒的简图,小箭头所指分别为限制性核酸内切酶 EcoRⅠ、 BamHⅠ的酶切位点,P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有 EcoRⅠ、 BamHⅠ的酶切位点,受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列有关叙述,错误的是( )
A.
将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切,在DNA连接酶作用下,生成由两个DNA片段连接形成的产物有两种
B.
DNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来,形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键
C.
为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化,酶切时可选用的酶是 EcoRⅠ和 BamHⅠ
D.
能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞表明该目的基因已成功导入该细胞
多选题
困难
1. 基因组编辑是由CRISPR/Cas9系统进行的,该系统由gRNA和Cas9蛋白组成,gRNA引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割来完成基因的编辑过程。用基因组编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中,然后通过核移植技术培育基因编辑猪,可用于生产基因工程疫苗,如图为基因编辑猪的培育流程。下列叙述错误的是( )
A.
CRISPR/Cas9系统进行基因编辑时发生的碱基互补配对方式是A-U、U-A、G-C、C-G
B.
Cas9在对基因进行切割时要破坏核苷酸之间的磷酸二酯键
C.
使图乙中2号猪的体细胞相互分离需要使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶
D.
图甲中gRNA和靶基因一条链配对,完成基因编辑后gRNA与靶基因要分离
单选题
普通
2. 某课题组为得到青蒿素产量高的新品系,将青蒿素合成过程的某一关键酶基因
导入普通青蒿,其过程如下图所示。下列有关叙述错误的是( )
A.
可依据标记基因对含有目的基因的农杆菌进行筛选
B.
酶1、酶2和酶3作用的化学键都是磷酸二酯键
C.
只要检测出青蒿细胞中含有fps基因,就代表高产青蒿素新品系培育成功
D.
农杆菌
质粒上的目的基因能转移到青蒿染色体
上
单选题
普通
3. 下列关于载体的叙述中,错误的是( )
A.
载体与目的基因结合后,实质上就是一个重组DNA分子
B.
对某种酶而言,载体最好只有一个切点,但还要有其他多种酶的切点
C.
目前常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒
D.
载体具有某些标记基因,便于对其进行切割
单选题
容易
1. 番茄不耐寒,冬季容易冻坏,难以储藏。我国科研人员从某植物中提取了一种抗冻基因AtCOR15a,经过一系列过程获得转基因抗冻的番茄新品种,操作流程如图。回答下列问题:
(1)
用PCR技术扩增AtCOR15a基因时需要添加引物,引物的作用是
。
(2)
如果要将AtCOR15a基因与质粒构建重组DNA分子,一般采用双酶切法,据图分析选用的两种限制酶组合是
。
(3)
图中是采用
法将目的基因转移到番茄细胞中。
(4)
为了提高AtCOR15a基因的表达能力,可将AtCOR15a基因与外源强启动子连接,如下图所示。利用PCR检测上述连接是否正确,可选择的引物组合是
。
(5)
为了进一步提高番茄的储藏时间,可从该植物体内提取ErsI基因(乙烯受体基因),按照下图流程将ErsI基因重新导回该植物,致使该植物原有ErsI基因翻译受抑制。已知限制酶EcoRI和XhoI、BamHI切割后露出的黏性末端碱基序列不同,据图分析,提取的目的基因A、B两端需分别添加
的识别序列。推测该方法提高番茄储藏时间的机理是
。
综合题
普通
2. 人工种植的香蕉大多是三倍体,依靠无性生殖来繁殖后代。目前,香蕉的种植面临着香蕉枯萎病的威胁,感染了病菌的香蕉大面积减产,甚至绝收。甚至有人认为,三倍体香蕉正在走向绝灭。为了解决这一问题,科学家利用基因工程技术培育出了转基因抗枯萎病香蕉。其具体培育过程如图所示。回答下列问题:
(1)
人工种植的香蕉不能通过有性生殖繁殖后代的原因是
。
(2)
获取目的基因时一般选择PstI、EcoRI两种限制酶对含有抗病基因的DNA分子进行切割,一般不选择SmaI,这是因为后者会
,从而导致抗病基因失去功能;构建含抗病基因的表达载体A时,选择PstI、EcoRI两种限制酶还有一个优点是能避免抗病基因或质粒被切割后形成自身环状结构,最可能的原因是
。
(3)
为初步检测A构建是否成功,对多个质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测,结果如下图所示。据图可知,酶切时用到的酶是
,质粒2和4构建成功的重组质粒的依据是
。
(4)
图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的
过程;植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、图中①、②过程的关键激素,它们的
(答两点)等都会影响植物细胞的发育方向。
综合题
普通
3. 重组人纤溶酶原激活剂(hPA)能够高效特异性地溶解血栓,目前已培育成功rhPA转基因兔,作为乳腺生物反应器批量生产药物。某科研团队构建PCL25/rhPA重组质粒如图1所示(该质粒以β-casein作为调控序列,以CMV为启动子,图1中Sall、Xhol、Notl所在位置表示相关限制酶切点),图2为培育rhPA转基因免时用的乳腺特异性表达载体及PCR检测原理图(PCR-F、PCR-R为引物序列)。请回答下列问题:
(1)
PCL25/rhPA重组质粒如图1所示。rhPA基因上游的CMV能被
结合,从而开启转录过程。在PCL25质粒的
限制酶切位点处插入化学合成的rhPAcDNA片段。
(2)
复制原点(ori)序列中A—T含量很高,有利于DNA复制起始时的解旋,原因是
。
(3)
氨苄西林抗性基因(Amp
R
)的作用是
。
(4)
能否用只含有氨苄西林的培养基筛选出导入重组质粒的细胞?
。原因是
。
(5)
为筛选出含有重组质粒P3(图3)的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如表(“+”代表生长,“—”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是
(填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是
。
平板类型
菌落类型
A
B
C
无抗生素
+
+
+
氨苄西林
+
+
-
四环素
+
-
-
氨苄西林+四环素
+
-
-
(6)
图2为培育rhPA转基因免时用的乳腺特异性表达载体及PCR检测原理图(PCR-F、PCR-R为引物序列)。结合图1可知,需用
酶(限制酶名称)切割PCl25/rhPA重组质粒,获得图2的线性化乳腺特异性表达载体。
综合题
普通