某课题组为得到青蒿素产量高的新品系，将青蒿素合成过程的某一关键酶基因导入普通青蒿，其过程如下图所示。下列有关叙述错误的是（　　）

1. 某课题组为得到青蒿素产量高的新品系，将青蒿素合成过程的某一关键酶基因 $\text{[math]}$ 导入普通青蒿，其过程如下图所示。下列有关叙述错误的是（　　）

A. 可依据标记基因对含有目的基因的农杆菌进行筛选 B. 酶1、酶2和酶3作用的化学键都是磷酸二酯键 C. 只要检测出青蒿细胞中含有fps基因，就代表高产青蒿素新品系培育成功 D. 农杆菌 $\text{[math]}$ 质粒上的目的基因能转移到青蒿染色体 $\text{[math]}$ 上

【考点】

基因工程的基本工具（详细）; 基因工程的操作程序（详细）;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

换一批

1. 下列关于载体的叙述中，错误的是（）

A. 载体与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子 B. 对某种酶而言，载体最好只有一个切点，但还要有其他多种酶的切点 C. 目前常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒 D. 载体具有某些标记基因，便于对其进行切割

单选题容易

2. 限制酶XbaⅠ和SacⅠ切出的黏性末端不同，将下图所示目的基因导入载体中，应选用的Ti质粒是（）

单选题容易

3. 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。下列说法正确的是（　　）

限制酶

BamHI

HindⅢ

EcoRI

SmaI

只别序列及切割位点

G↓GATC C

C CTAG↑G

A↓AGCT T

T TCGA↑A

G↓AATT C

C TTAA↑G

CCC↓GGG

GGG↑CCC

A. 限制酶只能从原核生物中分离纯化出来 B. 只有用同种限制酶切割DNA产生的黏性末端才能互补 C. 用图中质粒和外源基因DNA构建重组质粒，可使用SmaI切割 D. 使用EcoRI同时处理质粒和外源DNA，可能会发生质粒或者目的基因的自身环化

单选题容易

1. 基因组编辑是由CRISPR/Cas9系统进行的，该系统由gRNA和Cas9蛋白组成，gRNA引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割来完成基因的编辑过程。用基因组编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪，可用于生产基因工程疫苗，如图为基因编辑猪的培育流程。下列叙述错误的是（）

A. CRISPR/Cas9系统进行基因编辑时发生的碱基互补配对方式是A-U、U-A、G-C、C-G B. Cas9在对基因进行切割时要破坏核苷酸之间的磷酸二酯键 C. 使图乙中2号猪的体细胞相互分离需要使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶 D. 图甲中gRNA和靶基因一条链配对，完成基因编辑后gRNA与靶基因要分离

单选题普通

2. 将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因PinⅡ导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。如下图表示含目的基因的DNA分子和农杆菌质粒，图中Amp＇表示氨苄青霉素抗性基因，Neo＇表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的几种限制酶的切割位点。下列叙述正确的是（）

A. 用图中的限制酶构建重组质粒无法确定目的基因的插入方向 B. 可以用TthⅢ和BamHⅠ对目的基因和载体双酶切构建重组载体 C. 成功导入重组质粒的细胞会表现为不抗氨苄青霉素、抗新霉素 D. 通过PCR检测发现目的基因成功导入杨树细胞中即成功培育了抗虫杨树

单选题普通

3. 下列关于DNA 重组技术的基本工具的叙述，合理的是（）

A. 质粒是一种存在于原核细胞拟核DNA之外的裸露的环状DNA 分子 B. 只要选用两种不同的限制酶切割目的基因，都可以防止目的基因自身环化 C. 被用作“分子运输车”的质粒上常有特殊的抗生素合成基因，便于重组DNA 分子的筛选 D. DNA 连接酶和限制酶作用的结果是磷酸二酯键的形成或断裂

单选题普通

1. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病毒番木瓜，Ti质粒结构模式图如图所示。下列叙述正确的是（）

A. 农杆菌的T-DNA与番木瓜基因发生重组 B. 构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶 C. 含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性 D. 转基因抗病毒番木瓜不具有卡那霉素抗性

多选题容易

2. LacZ基因位于大肠杆菌质粒上，其编码产物Ʋ-半乳糖苷酶在X-gal和IPTC两种物质都存在时，可使大肠杆菌菌落呈蓝色，否则菌落呈白色。相关的转基因操作如图所示，其中①②③表示有关过程。下列相关叙述错误的是（）

A. 添加X-gal和IPTC的选择培养基中，不含目的基因的菌落均呈现蓝色 B. 为防止质粒相互连接及自身环化，可用两种识别不同序列但产生相同黏性末端的同尾酶切割质粒 C. ①过程的目的是增加一段与质粒切口处相同的黏性末端片段 D. ②过程应将目的基因连接在启动子与终止子之间，启动子是DNA聚合酶识别和结合的部位

多选题普通

3. 研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如图所示，a链和b链分别是相应基因转录的模板链。下列叙述正确的是（）

A. 图中b链的碱基序列黏性末端（5'→3'）为TCGA B. BamHI和HindⅢ作用的化学键均是磷酸二酯键 C. ②中需要DNA连接酶，此时目的基因插入到构巢曲霉启动子之后 D. ③中需将导入目的基因的农杆菌置于含潮霉素的培养基上筛选

多选题普通

1. 番茄不耐寒，冬季容易冻坏，难以储藏。我国科研人员从某植物中提取了一种抗冻基因AtCOR15a，经过一系列过程获得转基因抗冻的番茄新品种，操作流程如图。回答下列问题：

(1) 用PCR技术扩增AtCOR15a基因时需要添加引物，引物的作用是。

(2) 如果要将AtCOR15a基因与质粒构建重组DNA分子，一般采用双酶切法，据图分析选用的两种限制酶组合是。

(3) 图中是采用法将目的基因转移到番茄细胞中。

(4) 为了提高AtCOR15a基因的表达能力，可将AtCOR15a基因与外源强启动子连接，如下图所示。利用PCR检测上述连接是否正确，可选择的引物组合是。

(5) 为了进一步提高番茄的储藏时间，可从该植物体内提取ErsI基因（乙烯受体基因），按照下图流程将ErsI基因重新导回该植物，致使该植物原有ErsI基因翻译受抑制。已知限制酶EcoRI和XhoI、BamHI切割后露出的黏性末端碱基序列不同，据图分析，提取的目的基因A、B两端需分别添加的识别序列。推测该方法提高番茄储藏时间的机理是。

综合题普通

2. 人工种植的香蕉大多是三倍体，依靠无性生殖来繁殖后代。目前，香蕉的种植面临着香蕉枯萎病的威胁，感染了病菌的香蕉大面积减产，甚至绝收。甚至有人认为，三倍体香蕉正在走向绝灭。为了解决这一问题，科学家利用基因工程技术培育出了转基因抗枯萎病香蕉。其具体培育过程如图所示。回答下列问题：

(1) 人工种植的香蕉不能通过有性生殖繁殖后代的原因是。

(2) 获取目的基因时一般选择PstI、EcoRI两种限制酶对含有抗病基因的DNA分子进行切割，一般不选择SmaI，这是因为后者会，从而导致抗病基因失去功能；构建含抗病基因的表达载体A时，选择PstI、EcoRI两种限制酶还有一个优点是能避免抗病基因或质粒被切割后形成自身环状结构，最可能的原因是。

(3) 为初步检测A构建是否成功，对多个质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如下图所示。据图可知，酶切时用到的酶是，质粒2和4构建成功的重组质粒的依据是。

(4) 图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的过程；植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、图中①、②过程的关键激素，它们的（答两点）等都会影响植物细胞的发育方向。

综合题普通

3. 重组人纤溶酶原激活剂（hPA）能够高效特异性地溶解血栓，目前已培育成功rhPA转基因兔，作为乳腺生物反应器批量生产药物。某科研团队构建PCL25/rhPA重组质粒如图1所示（该质粒以β-casein作为调控序列，以CMV为启动子，图1中Sall、Xhol、Notl所在位置表示相关限制酶切点），图2为培育rhPA转基因免时用的乳腺特异性表达载体及PCR检测原理图（PCR-F、PCR-R为引物序列）。请回答下列问题：

(1) PCL25/rhPA重组质粒如图1所示。rhPA基因上游的CMV能被结合，从而开启转录过程。在PCL25质粒的限制酶切位点处插入化学合成的rhPAcDNA片段。

(2) 复制原点（ori）序列中A—T含量很高，有利于DNA复制起始时的解旋，原因是。

(3) 氨苄西林抗性基因（Amp^R）的作用是。

(4) 能否用只含有氨苄西林的培养基筛选出导入重组质粒的细胞？。原因是。

(5) 为筛选出含有重组质粒P3（图3）的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如表（“+”代表生长，“—”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是。

平板类型	菌落类型
平板类型	A	B	C
无抗生素	+	+	+
氨苄西林	+	+	-
四环素	+	-	-
氨苄西林+四环素	+	-	-

(6) 图2为培育rhPA转基因免时用的乳腺特异性表达载体及PCR检测原理图（PCR-F、PCR-R为引物序列）。结合图1可知，需用酶（限制酶名称）切割PCl25/rhPA重组质粒，获得图2的线性化乳腺特异性表达载体。

综合题普通