1. 科学家采用了下图所示流程,将除草剂抗性基因导入到玉米细胞中,以期获得抗除草剂性状的转基因玉米。转化过程中常有残留农杆菌附着在愈伤组织表面,进而导致未转化的愈伤组织也可能在含除草剂的培养基中生长,称为假阳性。请回答下列问题:

   

注:报告基因含有内含子,不能在原核生物中正确表达,其正确表达产物能催化无色物质K呈蓝色

(1) 基因表达载体除了含目的基因、特定限制酶切割位点、复制原点外,还必须有,以确保导入的基因正常表达。除草剂抗性基因G必须插入到Ti质粒的T-DNA中,原因是
(2) 利用PCR技术,可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有除草剂抗性基因G。除草剂抗性基因G的部分序列如下:

5'-ATGGCT……AGGAAC-3'

3'-TACCGA……TCCTTG-5'

根据上述序列应选择引物(填字母)进行PCR;一个目的基因G扩增5次,共需要个引物。

A.引物:5'-TACCGA—3'                                 B.引物:5'—GTTCCT—3'

C.引物:5'—AUGGCU-3'                                D.引物:5'—ATGGCT—3'

(3) 通过在培养基中添加进行“筛选1”,通常在培养基中添加无色物质K进行“筛选2”的目的是。从抗除草剂玉米叶片中提取抗除草剂基因的DNA过程中,加入95%冷酒精的目的是
(4) 科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中,目的是
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 转基因生物的安全性问题; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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