双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交——杂交瘤细胞技术(免疫的B 淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：

1. 双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交——杂交瘤细胞技术(免疫的B 淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：

(1) 诱导细胞融合时利用的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶，能够与细胞膜上的(填化学本质)发生作用，使得细胞互相凝聚，细胞膜上的重新排布，细胞发生融合。筛选1利用HAT 培养基进行筛选，而筛选2通过多次的来完成。过程②选用的骨髓瘤细胞 (选填“能”或“不能”)在 HAT培养基上生长。

(2) 图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，需进行传代培养。

(3) 与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是。

【考点】

动物细胞培养技术;

【答案】

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综合题普通

1. 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题：

(1) 由图可看出，单克隆抗体制备过程运用的动物细胞工程技术有（写出两种），给小鼠注射HCG的目的是，①过程促进两种细胞融合的方法有（写出两种）。

(2) 图中过程②③为两次筛选过程，过程②是指细胞群稀释，然后都放在特定的培养基的多孔培养皿中培养，只有能够存活且增殖；过程③是用方法，经多次筛选得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞群。

(3) 最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是。通过该过程生产的单克隆抗体可以与特异性结合，从而诊断早孕。

综合题普通

2. 传统影像学诊断在发现转移瘤形成时往往已延误最佳治疗时机。目前可通过液体活检来检查血液中的循环肿瘤细胞（CTCs），用以诊断是否存在癌症转移，步骤如下：

注：上皮组织细胞来源的CTCs与正常白细胞表面蛋白质的一些差异（如下表）

细胞表面抗原标志物表达差异

蛋白种类

细胞类型

CD45

EpCAM

白细胞

有

无

CTCs

无

有

(1) 制备单克隆抗体：首先用CD45蛋白对小鼠进行免疫，然后经过图1的①、②、③、④等步骤，获得大量单克隆抗体A；再用EpCAM免疫小鼠，经过相同步骤获得单克隆抗体B。

步骤①涉及到的细胞工程技术主要有和。

步骤②通常使用选择培养基，主要目的是筛选出。

步骤③主要需要经过和抗体检测，并经多次筛选，最终获得。

步骤④是大规模培养，主要方法有：和。体外培养到一定时期的单克隆杂交瘤细胞会因为（至少答出两点）而分裂受阻，需进行传代培养。

(2) 利用免疫磁珠进行分离：取待测人员少量血液于采集管内，将连接有单克隆抗体（填“A”或“B”）的磁珠加入采集管，外加磁场使磁珠定向移动到指定区域并取出，这样可以排除非肿瘤细胞的干扰；再将连接有单克隆抗体（填“A”或“B”）的磁珠加入采集管，外加磁场使磁珠定向移动到指定区域取出，收集CTCs。

(3) 计数并诊断：若出现（细胞）数量超出正常范围，即可诊断发生癌细胞转移。

综合题普通

3. 为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图所示。请回答下列问题：

(1) 单克隆抗体的制备涉及细胞工程中的、技术。

(2) 步骤①常用方法包括PEG融合法、电融合法和诱导法等。若经过步骤①后获得的细胞均为2个细胞融合而来，则经过该过程后，产生的融合细胞最多有种。对杂交细胞用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，然后对杂交瘤细胞进行，再经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

(3) 单克隆抗体的特点是（至少答出两点）。

(4) 步骤④是将获得的a和b这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC。

综合题普通