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1. 棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫。CrylA基因的表达产物对棉铃虫有较强的毒性,GNA基因的表达产物则对蚜虫有较强的毒性。研究人员将Cry1A基因和GNA基因连接在一起,构建了如图所示双抗虫基因的重组表达载体,并将其转入烟草细胞,从而获得了具有双抗性的转基因烟草。回答下列问题:
注:EcoRI、HindⅢ、PstI、KpnI表示限制酶;Klenow能将黏性末端转变为平末端。
(1)
Cry1A基因和GNA基因经EcoRI和HindⅢ分别酶切后,形成的黏性末端
(填“相同”或“不同”),两基因无法直接连接。Klenow处理后,两基因片段一端的黏性末端转变为平末端,在
DNA连接酶的作用下,可恢复被限制酶切开的
(填化学键名称),将两基因相连。
(2)
过程④应选择
(填图中限制酶)切割植物表达载体,以便形成重组表达载体。
(3)
将目的基因导入烟草细胞的方法有
和农杆菌转化法。转入了重组表达载体的农杆菌在含有链霉素的培养基上
(填“能”或“不能”)生长。
(4)
为了防止转基因作物的目的基因通过花粉转移到自然界中的其他植物中,可设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中,原因是
。
【考点】
转基因生物的安全性问题; 基因工程的基本工具(详细); 基因工程的操作程序(详细);
【答案】
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综合题
普通
能力提升
换一批
1. 某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体,以期快速检测该病毒,其主要技术路线如图所示。
回答下列问题:
(1)
与小鼠骨髓瘤细胞融合前,已免疫的脾细胞(含浆细胞)
(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量;添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合,该过程中PEG对细胞膜的作用是
。
(2)
在杂交瘤细胞筛选过程中,常使用特定的选择培养基(如HAT培养基),该培养基对
和
生长具有抑制作用。
(3)
单克隆抗体筛选中,将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交,其目的是
。
(4)
构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是
。
综合题
普通
2. 脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种特有成分,能诱发炎症反应。CD14蛋白是LPS的受体,能识别并结合LPS,在LPS性炎症反应、内毒素休克等病理反应中起重要作用。为制备抗CD14蛋白的单克隆抗体,研究人员通过基因工程构建了含有CD14蛋白基因的重组表达载体,如图1所示。制备抗CD14蛋白的单克隆抗体的过程如图2所示。回答下列问题:
(1)
限制酶XhoI和SalI切割DNA产生的黏性末端
(填“相同”或“不相同”),用这两种酶处理CD14蛋白基因和载体后,再用
酶进行拼接。
(2)
CD14蛋白基因插入载体时,会形成正向连接和反向连接的两种重组载体。用XhoI和SalI进行酶切,对CD14蛋白基因插入后的连接方向进行鉴定。若重组载体能被再次切开,则说明CD14正向接入载体。若重组DNA不能被再次切开,则说明CD14反向接入载体。判断的理由是
。
(3)
从培养液中收集CD14蛋白并对小鼠进行免疫接种。图2中,过程②用灭活的病毒处理,其目的是
。过程④常用
对抗体进行专一性检测。
(4)
图2中,过程⑥是从小鼠的
中提取抗CD14蛋白的单克隆抗体,这些抗体可减轻革兰氏阴性细菌入侵导致的炎症反应,其原理是
。
综合题
普通
3. 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:
限制酶
Bam
HⅠ
Hin
dⅢ
Eco
RⅠ
Sma
Ⅰ
识别序列及
切割位点
(1)
一个图1所示的质粒分子经
Sma
Ⅰ切割前后,分别含有
、
个游离的磷酸基团。
(2)
要用图1中的质粒和图2中外源DNA构建重组质粒,不能使用
Sma
Ⅰ切割,原因是
。
(3)
与只使用
Eco
RⅠ相比较,使用
Bam
HⅠ和
Hin
dⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止
。
(4)
为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入
酶。
(5)
重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了
。
综合题
普通