为建设社会主义新农村，解决农村生产生活垃圾处理的问题，某办事处给出了处理方案：

1. 为建设社会主义新农村，解决农村生产生活垃圾处理的问题，某办事处给出了处理方案：

(1) 某团队从土壤中筛选出降解玉米秸秆的复合菌的过程中，为了避免杂菌污染，取样时应注意（至少答出2点）。

(2) 若要筛选出能分解包装塑料的细菌应使用选择培养基，其作用原理是。

(3) 调查小组为了从被污染的湖水中分离获得能降解环境污染物M（一种含有C、H、O、N的有机物）的细菌的单菌落，设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

成分	无机盐	淀粉	M	琼脂	水
培养基甲	+	+	+	-	+
培养基乙	+	+	+	+	+

①据表判断，其中成分M主要是作为起作用，培养基（填“甲”或“乙”）可用于分离能降解M的目的菌。

②在3个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为156、178和191。该过程中采取的接种方法是，1mL原土壤样液中的细菌数量为个。

【考点】

微生物的分离和培养; 测定某种微生物的数量; 培养基对微生物的选择作用;

【答案】

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实验探究题普通

1. 近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C₁₈H₂OFN₃O₄）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株A。筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题：

(1) 利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。

(2) 筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入作为唯一碳源或氮源。用于培养菌株A的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株A提供碳源、氮源和。

(3) 过程Ⅲ所采用的接种方法是，与平板划线法不同的是，此方法还可以用于。过程Ⅱ中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是145、163、154，故推测B瓶中细菌的数量为个/mL。

(4) 该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株A降解OFL能力的影响，请帮助其设计实验并写出实验思路：。

实验探究题普通

2. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。回答下列问题：

(1) 步骤③中需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次的作用是。

(2) 下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的培养基，原因是。

培养基类型	培养基组分
培养基甲	甘露醇、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、NaCl、K₂SO₄、CaCO₃、蒸馏水
培养基乙	甘露醇、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、NaCl、K₂SO₄、CaCO₃、蒸馏水、琼脂

(3) 该实验用于纯化培养的方法是，若在④的各组平板上统计的菌落的数量为108、120、138个，则每克土壤中含有的固氮菌为个。

(4) 另一组实验中发现，当培养时间过长时，在固氮菌大菌落四周出现了少量杂菌小菌落，进一步研究表明这些杂菌不能利用空气中的氮气，则其氮源来自于。

(5) 将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12，为进一步鉴定其固氮能力，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30天后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。

注：CK：对照处理组；

N：尿素处理组（每盆土壤浇50mL有氮全营养液：成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）；

CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自生固氮菌的无氮植物营养液）。

①实验结果表明：施用尿素处理和接种CM12处理均能增加土壤有机氮含量。与CK组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约%。

②研究表明，土壤中碳氮比低于40：1时，固氮菌的固氮作用迅速停止。因此优良菌肥最好与（填“有机肥”“氮肥”“磷肥”或“钾肥”）配合施用。

实验探究题普通

3. 水稻恶苗病主要由镰刀菌引起，是水稻苗期至穗期的主要病害之一。研究人员开展相关实验，从水稻根基土壤中筛选水稻恶苗病拮抗菌，并探究其抗菌机制。相关实验过程如图所示。

回答下列问题：

(1) 步骤①中需从（填“患病”或“健康”）的水稻根基土壤获取菌株。步骤②和③中“a”表示。接种后在28℃条件下培养1-2天，根据对步骤④中获得的纯培养物进行初步的鉴定和分类。

(2) 按照步骤⑤进行拮抗菌筛选，在甲处接种等量的拮抗菌菌株J1、J2后，培养一段时间，结果如图所示。据图判断，的抑菌效果更佳，依据是。该实验还需设置对照组，对照组的操作是。

(3) 用去除拮抗菌菌株J1后的无菌发酵液处理病原菌菌丝体，发现菌丝明显变短，推测拮抗菌抑菌的原理是。

(4) 实验筛选出的菌株需要先进行大田种植试验以检测防治效果，原因是。

实验探究题普通