A型塞内卡病毒(SVA)会导致猪患水疱传染病,症状与猪口蹄疫等传染病非常相似,增加了临床鉴别诊断的难度,研究人员尝试开发一种快速、准确检测SVA病毒的方法。已知VP1蛋白是SVA核衣壳的主要成分,可作为SVA诊断的靶蛋白。
(1)用纯化的VP1多次免疫小鼠,然后诱导小鼠的________融合,常用方法有PEG融合法、电融合法和________。通过选择培养的方法筛选出杂交瘤细胞,再经过96孔板克隆化培养和抗体检测筛选出能够________的杂交瘤细胞。将筛选到的2个杂交瘤细胞株分别注射到小鼠腹腔中,从腹水中成功提取得到了2种鼠源单克隆抗体——2E10和3E4。
为进一步确定2E10和3E4在VP1上的结合位点,将VP1蛋白截为4段(VP1-1~VP1-4),电泳后分别用2E10和3E4为探针进行杂交,结果如图所示。
(2)根据实验结果,可判断2E10和3E4与VP1的结合位点是________(填“相同”或“不同”)的,依据是________。
用SVA感染小鼠肾脏细胞后,37℃培养24小时,去垢剂处理增加细胞膜的通透性,将处理后的细胞分为两组,固定在介质上,分别加入2E10和3E4,一段时间后冲洗掉未结合的抗体,然后依次加入酶标抗体和底物,酶标抗体与鼠源抗体结合后可催化底物发出绿色荧光。
(3)对照组应选择________细胞,其余处理与实验组一致。
(4)如果实验结果为______,则证明制备的单克隆抗体具有特异性。
A. 对照组细胞均出现绿色荧光,实验组细胞均无绿色荧光 |
B. 对照组细胞均无绿色荧光,实验组细胞均出现绿色荧光 |
C. 对照组细胞均无绿色荧光,实验组细胞也无绿色荧光 |
D. 对照组细胞出现绿色荧光,实验组细胞出现绿色荧光 |
用获得的2种单克隆抗体制作快速检测SVA病毒的试纸条,如下图所示。当待测样品滴入样品垫后会沿着试纸条向右扩散,结合垫处含有过量胶体金标记的2E10,也可向右扩散,当胶体金颗粒聚集时才会出现可见条带,检测线、质控线处包埋固定的抗体依次是3E4和山羊抗鼠IgG(可特异性结合各种鼠源抗体)。
(5)在检测过程中,试纸上可发生待测病毒抗原与抗体结合的区域是________。病毒检测阳性的结果为检测线和质控线处均出现条带,请解释条带形成的原因________。