下图1表示某DNA片段及限制酶酶切位点，用限制酶XhoⅠ和SalⅠ分别处理该DNA片段后，酶切产物电泳分离的结果如图2所示。下列叙述错误的是（）

1. 下图1表示某DNA片段及限制酶酶切位点，用限制酶XhoⅠ和SalⅠ分别处理该DNA片段后，酶切产物电泳分离的结果如图2所示。下列叙述错误的是（）

A. 不同的限制酶切割DNA后形成的黏性末端可能相同 B. 限制酶XhoⅠ与限制酶SalⅠ识别的核苷酸序列不同 C. 泳道①②分别是限制酶XhoⅠ和限制酶SalⅠ处理得到的产物 D. 用限制酶XhoⅠ和限制酶SalⅠ同时处理该DNA片段，可得到6种电泳产物

【考点】

基因工程的基本工具（详细）;

【答案】

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单选题普通

基础巩固

能力提升

变式训练

拓展培优

真题演练

换一批

1. Sau3AI和BamHI的识别序列及切割位点如表所示。某DNA分子经Sau3AⅠ和BamHⅠ分别切割以后，可形成4个和2个大小不同的片段。下列有关叙述正确的是（）

限制酶名称	识别序列和切割位点
BamHI	G↓GATCC
Sau3AI	↓GATC

A. 两种限制酶切割后形成的黏性末端不相同 B. 能被Sau3AI识别的DNA位点均能被BamHI识别 C. 该DNA分子上有2个BamHⅠ不能识别但Sau3AⅠ能识别的酶切位点 D. 该DNA分子经Sau3AⅠ和BamHⅠ共同切割后可形成6个片段

单选题容易

2. 如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将目的基因插入质粒上的 A 处，则切割基因时可用的限制酶是（）

A. HindⅢ B. EcoRI C. EcoB D. PstI

单选题容易

3. 以下说法正确的是（　　）

A. 所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B. 质粒是基因工程中惟一运载体 C. 限制酶和DNA连接酶的作用部位相同 D. 黑农五号是通过杂交育种方法获取的

单选题容易

1. 下列有关基因工程操作工具的叙述，正确的是（）

A. 限制酶能识别并切割DNA任意序列 B. DNA连接酶与Taq酶的作用位点不同 C. 没有与目的基因重组的质粒不可以进入受体细胞 D. 使用质粒作为载体可以避免目的基因在受体内被分解

单选题普通

2. 用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性内切核酸酶分别处理同一 DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（）

A. 图1中两种酶识别的核苷酸序列不同 B. 图2 中酶切产物可用于构建重组 DNA C. 泳道①中是用 SalⅠ处理得到的酶切产物 D. 图中被酶切的DNA 片段是单链DNA

单选题普通

3. BamHI、MboI、SmaI三种限制酶的识别序列和切割位点依次为5'-G↓GATCC-3'、5'↓GATC-3'、5^'-CCC↓GGG-3'。下图表示某DNA片段的部分碱基序列，已知其余序列不含这三种限制酶的识别序列。下列叙述正确的是（）

A. 若用SmaI完全切割该DNA，则其产物的长度为634bp、896bp、758bp B. 若虚线方框内的碱基对被T-A替换，则用SmaI完全切割该DNA可产生3种片段 C. 若用MboI和BamHI切割DNA，可形成相同的黏性末端 D. 用SmaI切割DNA产生的片段，可用E．coliDNA连接酶重新将其连接

单选题普通

1. 下图为基因工程中构建重组质粒的过程示意图，下列有关说法正确的是（　　）

A. EcoR V切制出来的载体P1为平末端 B. T4DNA连接酶既可以连接平末端又可以连接黏性末端 C. 构建基因表达载体用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶和载体等 D. 天然质粒具备限制酶切割位点，标记基因，即可作为载体

多选题容易

2. 像BclI(—T↓GATCA—)、BglⅡ(—A↓GATCT一)、Mbo I(—↓GATC一)这样，识别序列不同，但能产生相同黏性末端的一类限制酶被称为同尾酶。如图表示目的基因及质粒上的酶切位点。选用不同的限制酶对质粒和目的基因进行切割，并用DNA连接酶进行连接。下列分析错误的是（）

A. A B. B C. C D. D

多选题普通

3. 某研究小组拟用限制酶和DNA连接酶为基本工具，对目的基因和质粒进行切割、连接，以构建含目的基因的重组表达载体。该小组前期研究获得如下2个信息：①4种限制酶的识别序列及切割位点、目的基因所在的外源DNA片段中各种酶识别位置以及质粒上4种酶的识别位置(如下图)；②有些不同种类的酶能识别DNA分子中不同核苷酸序列，但切割产生相同黏性末端，这样的限制酶称为同尾酶。下列有关叙述错误的是（）

A. 构建重组表达载体时，目的基因和质粒均用酶3切割，用E.coliDNA连接酶连接成功率最高 B. 构建重组表达载体时，目的基因用酶2切割，质粒用酶4切割，用T4DNA连接酶连接成

功率最高

C. 目的基因和质粒均用酶1切割，用T4DNA连接酶连接构建重组表达载体既方便操作又容易成功 D. 酶1和酶3属于同尾酶，切割产生相同的黏性末端，但不适宜使用二者来构建重组表达载体

多选题普通

1. 我国玉米的生产一直受到虫害的严重影响，其中鳞翅目害虫亚洲玉米螟对我国玉米生产的危害较为显著。通过基因工程育种，将抗虫基因crylAb13转入玉米，能够显著提高玉米对玉米螟的抗性。过程如图1所示，其中基因Bar为抗除草剂基因。回答下列问题：

(1) 根据基因表达载体的结构推测，抗除草剂基因Bar的作用是。基因cry1Ab13必须插入Ti质粒的T-DNA中，原因是。

(2) 为了减少限制酶识别序列的影响，研究人员利用无缝克隆In=Fusion技术实现过程②目的。原理如图2所示。利用限制酶将表达载体线性化。过程①利用技术获取基因crylAb13，该过程中要在引物1和引物2的（填“3＇”或“5＇”）端增加对应表达载体中的片段。将线性化的表达载体和基因cry1Ab13混合进行In-Fusion反应，获得重组表达载体。

(3) 过程③利用构建好的重组表达载体转化经处理过的农杆菌，然后侵染玉米愈伤组织，进而获得转基因玉米植株。研究人员探究了农杆菌浓度对基因转化效率的影响，结果如图3所示。实验结果表明，转化效率较高的农杆菌浓度范围为OD600。为了进一步对侵染条件进行优化，可进行实验探究的课题是。

综合题普通

2. 巴斯德毕赤酵母以甲醇作为唯一碳源，不能合成组氨酸。科研人员利用巴斯德毕赤酵母、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、含有组氨酸合成基因的质粒生产转基因重组酵母乙肝疫苗。HBsAg基因上的两个限制酶切割位点如图1所示。请回答下列问题：

(1) 利用PCR技术扩增HBsAg基因的原理是。设计引物是PCR技术中至关重要的一环，图2中，引物Ⅰ、引物Ⅱ中有一个设计不合理，请指出并说明原因：。

(2) 研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为

，用限制酶Sma Ⅰ切出的末端Ⅱ为

，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点：、。HBsAg基因转录时以图1中α链为模板链，则插入质粒时，酶切位点（填“1”或“2”）离启动子更近，原因是。

(3) 筛选成功导入重组质粒的巴斯德毕赤酵母并观察菌落的形态，所用培养基的特点为。

综合题普通

3. 抗体分子含有两条短肽链和两条长肽链，科研人员将小鼠编码抗体（抗禽流感病毒HA抗原）可变区的基因片段与人编码抗体恒定区的基因片段整合，构建图1所示表达载体（HindⅢ等表示不同限制酶的切割位点，EcoRⅤ的识别序列和切割位点是GAT↓ATC），导入中国仓鼠卵巢细胞后，筛选能够稳定表达的细胞株，成功获得大量嵌合抗体（图2），嵌合抗体因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。请根据资料回答下列问题：

(1) 为构建人鼠嵌合抗体基因表达载体，需要对编码抗体不同片段的基因进行重组，为此需从分泌鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取鼠抗体mRNA，经逆转录得到鼠抗体cDNA用于PCR技术扩增，并分别与人抗体的拼接。

(2) 在PCR反应体系中需加入模板、4种脱氧核苷酸、等（至少答两个）。

(3) 图中①是识别和结合的部位。构建该基因表达载体时，先将人抗体的长链、短链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游，这一过程需要用到多种限制酶，如获得鼠抗体长链可变区基因用酶切；图中⑤和⑥用连接酶连接。

(4) 通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体，提高了疗效，推测该嵌合抗体的优点是。

综合题普通

1. 限制性内切酶EcoRI识别并切割

双链DNA，用EcoRI完全酶切果蝇基因组DNA，理论上得到DNA片段的平均长度（碱基对）约为（）

A. 6 B. 250 C. 4000 D. 24000

单选题普通

2. 下列有关病毒在生物学和医学领域应用的叙述，错误的是（　　）

A. 灭活的病毒可用于诱导动物细胞融合 B. 用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体 C. 基因工程中常用噬菌体转化植物细胞 D. 经灭活或减毒处理的病毒可用于免疫预防

单选题普通

3. 用Xho I和Sal I两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（）

A. 图1中两种酶识别的核苷酸序列不同 B. 图2中酶切产物可用于构建重组DNA C. 泳道①中是用Sal I处理得到的酶切产物 D. 图中被酶切的DNA片段是单链DNA

单选题普通