滥用抗菌药物带来的细菌耐药性日趋严重。益生菌本身及其代谢产物具有广谱抗菌作用，筛选不同动物来源的益生菌是“减抗限抗”大背景下抗生素替代品开发的一大趋势。研究者对动物来源的益生芽孢杆菌的形态学、耐胆盐等进行研究，请回答下列问题。

1. 滥用抗菌药物带来的细菌耐药性日趋严重。益生菌本身及其代谢产物具有广谱抗菌作用，筛选不同动物来源的益生菌是“减抗限抗”大背景下抗生素替代品开发的一大趋势。研究者对动物来源的益生芽孢杆菌的形态学、耐胆盐等进行研究，请回答下列问题。

(1) 分离筛选健康牛粪便中的短小芽孢杆菌。取10g健康牛粪便加入mL无菌水中充分震荡，过滤得到10^-1的悬液。进行系列稀释后用法进行接种，每个浓度重复3次。37℃条件下将平板倒置培养24小时，根据特征鉴别出芽孢杆菌。

(2) 要进一步分离纯化菌种，图1中（填字母）所示才是正确的划线操作。其他划线方法错误的原因是。

(3) 通过上述操作即可获得短小芽孢杆菌。已知小肠中的胆盐浓度通常在0.03%～0.3%范围内波动，图2为短小芽孢杆菌在不同胆盐含量下的生长情况，分析短小芽孢杆菌在畜禽的肠道中能否存活？原因是

【考点】

微生物的分离和培养;

【答案】

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实验探究题普通

1. 经人工诱变后，部分细菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了营养缺陷型菌株，这在工业生产上有较广阔的应用前景。以下是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程，请回答下列问题：

(1) 制备如图所示的培养基除含有细菌必需的水、碳源、等营养物质外，还需要加入。

(2) 倒平板的适宜温度是50℃左右，待平板冷凝后，要将平板倒置，这样做的目的是。

(3) 根据用途分类，图中基本培养基属于（填“选择”或“鉴别”）培养基。

(4) 进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至（填“基本”或“完全”）培养基上，原因是。

(5) 利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取（填“菌落A”或“菌落B”）进行接种培养，并进一步鉴定。

(6) 科研人员用放射线处理目的菌获得两个突变株C和D，然后对突变株C和D进行实验，结果如表所示。

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
C	不生长	添加营养物质甲，能生长
D	不生长	添加营养物质乙，能生长
C+D	能生长	不添加营养物质甲、乙，都能生长

①突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是。

②将突变株C和D混合在一起，接种于一般培养基上，都能生长的最可能的原因是。

实验探究题普通

2. 二硝基甲苯遇碱变红，如图表示从被二硝基甲苯污染的土壤中分离具有降解二硝基甲苯能力的光合细菌——球形红细菌的过程。回答下列问题：

(1) 若需增加目的菌的浓度，需在相应的培养基中进行选择培养，培养基除了为微生物的生长、繁殖提供水和氮源外，还要提供（答出两点）等基本营养成分。

(2) 将10g土壤样品加入装有无菌水的三角瓶中制备土壤浸出液。②过程的目的是；③过程所用的接种方法为法。

(3) 要测定培养液中的菌体数，可选用稀释涂布平板法统计活菌数目，在5个培养基平板上共接种稀释倍数为10⁵的土壤样液0.5mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191，则每毫升土壤样液中的细菌数量为个。用此方法测定的球形红细菌数量比实际活菌数量少，原因是。若用稀释涂布平板法计数时，某一实验组平板上菌落平均数为46个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，请分析说明空白对照组出现菌落的可能性原因是（答出两点）。

(4) 图中甲、乙培养基需置于有光条件下培养，主要原因是。

实验探究题普通

3. 研究发现黄芩提取物可以抑制金黄色葡萄球菌的生长。某生物兴趣小组采用煎煮法和乙酸乙酯浸泡法提取黄芩中的有效成分，并采用纸片扩散法（纸片用黄芩提取物浸过后置于培养基上，培养并观察纸片周围的抑菌圈）测定黄芩对金黄色葡萄球菌的抑菌效果，结果如下表。回答下列问题：

提取方法	黄芩提取物浓度/g·mL^-1	抑菌圈直径/mm
煎煮法	1.0	9.54
乙酸乙酯浸泡法	1.0	11.45

(1) 利用煎煮法提取黄芩中的有效成分时，影响提取效率的因素有（答出两点）。

(2) 利用乙酸乙酯浸泡法提取黄芩中的有效成分时，对含水量高的新鲜黄芩粉碎后要进行处理，目的是。提取黄芩中的有效成分时不宜采用明火加热，应采用的加热方法是，原因是。

(3) 科研人员利用纸片扩散法检测抑菌效果时，应该注意控制的无关变量有（答出两点）。根据表中实验结果分析，利用（填“煎煮法”或“乙酸乙酯浸泡法”）提取的黄芩抑菌效果较差，原因可能是。

实验探究题普通