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1. 如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题：

(1) a代表的物质和质粒的化学本质相同，都是(写中文名字)。自然情况下大肠杆菌能发生的可遗传变异有。
(2) 下列常在基因工程中用作载体的是__________(填字母)。 A. 苏云金杆菌抗虫基因 B. 土壤农杆菌环状RNA分子 C. 大肠杆菌的质粒 D. 动物细胞的染色体
(3) 氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上被称为，其作用是。
(4) 若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为；切割形成以上片段的限制酶的识别序列是。可使用把质粒和目的基因连接在一起。
(5) 某种限制酶识别的序列及切点为 ， 那么含该序列的DNA片段被切割后形成的结果是。
【考点】
基因工程的基本工具（详细）;
【答案】

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1. 某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。

   

回答下列问题：

(1) 与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞（含浆细胞）（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是。
(2) 在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对和生长具有抑制作用。
(3) 单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是。
(4) 构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是。

   
综合题 普通
2. 脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种特有成分，能诱发炎症反应。CD14蛋白是LPS的受体，能识别并结合LPS，在LPS性炎症反应、内毒素休克等病理反应中起重要作用。为制备抗CD14蛋白的单克隆抗体，研究人员通过基因工程构建了含有CD14蛋白基因的重组表达载体，如图1所示。制备抗CD14蛋白的单克隆抗体的过程如图2所示。回答下列问题：

(1) 限制酶XhoI和SalI切割DNA产生的黏性末端（填“相同”或“不相同”），用这两种酶处理CD14蛋白基因和载体后，再用酶进行拼接。
(2) CD14蛋白基因插入载体时，会形成正向连接和反向连接的两种重组载体。用XhoI和SalI进行酶切，对CD14蛋白基因插入后的连接方向进行鉴定。若重组载体能被再次切开，则说明CD14正向接入载体。若重组DNA不能被再次切开，则说明CD14反向接入载体。判断的理由是。
(3) 从培养液中收集CD14蛋白并对小鼠进行免疫接种。图2中，过程②用灭活的病毒处理，其目的是。过程④常用对抗体进行专一性检测。
(4) 图2中，过程⑥是从小鼠的中提取抗CD14蛋白的单克隆抗体，这些抗体可减轻革兰氏阴性细菌入侵导致的炎症反应，其原理是。
综合题 普通
3. 如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图中所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达[5′AOX1和3′AOX1(TT)分别是AOX1基因的启动子和终止子]。请分析回答下列问题：

(1) 为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上，这样设计的优点是

。
(2) 酶切获取HBsAg基因后，需用将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取。
(3) 步骤3中应选用限制酶来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
(4) 为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用技术进行检测。
(5) 转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
综合题 普通