①获得GFP基因。方法一：可从库中获得GFP基因的序列信息，再通过人工合成的方法获得。方法二：以含GFP基因的质粒作为进行PCR，扩增得到大量GFP基因。

②制备重组质粒。将基因的启动子和GFP基因相连后，再与质粒相连。

③导入受体细胞。将重组质粒导入斑马鱼的受精卵，选择受精卵为受体细胞的原因是。

④筛选G品系斑马鱼。若在荧光显微镜下观察小鱼的各个器官时发现，表明成功得到G品系斑马鱼。

⑤筛选纯合G品系斑马鱼。鉴定GFP插入的位置，针对插入位点的上下游设计了引物1、2，针对GFP基因自身序列设计了引物3、4，各引物的位置如图1所示。将G品系斑马鱼相互交配，提取不同子代个体的DNA用引物1、2进行PCR并电泳，结果如图2所示。加样孔对应的个体是纯合G品系斑马鱼。若改用引物3、4进行PCR并电泳，加样孔对应的个体是纯合野生型斑马鱼。

①tRNA丰度的变化对蛋白质折叠有重要影响，人为提升细胞tRNA丰度后会导致多肽空间错误折叠率增加。

②分析大肠杆菌基因发现，其稀有密码子聚集区位于能够编码且控制蛋白质结构相关序列的下游，并且稀有密码子与蛋白质二级结构正确形成的关系更密切。

③优化荧光素酶报告基因关键功能结构域中的200个密码子后会导致荧光素酶活性降低。

④核糖体在编码蛋白结构域连接区的mRNA上移动较慢。

⑤在大肠杆菌中优化稀有密码子虽然可以提高蛋白质总产量，却也导致蛋白质错误折叠率上升。根据事实①~⑤推测密码子使用的偏嗜性对翻译后加工的影响机制是。

注：泡泡体积表示强度，体积越大，强度越高。

表格表明：M蛋白。