1. 基因工程在医药卫生领域的应用主要体现在以下两方面:

应用一:对微生物或动植物的细胞进行基因改造,使它们能够生产药物,如重组人干扰素的市场化生产。干扰素是细胞合成并分泌的一种糖蛋白,几乎能抵抗所有病毒引起的感染,同时对乳腺癌、骨髓癌、淋巴癌,以及某些白血病有一定疗效,临床需求量大。回答问题(1)和(2)。

应用二:让哺乳动物本身批量生产药物,如重组血清白蛋白的批量生产。科学家将血清白蛋白基因导入奶牛基因组,使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有血清白蛋白。血清白蛋白是人体血浆蛋白中最主要的组成部分,其作用主要有两方面:一是维持人体正常的营养状态,二是维持血浆等胶体的渗透压。回答问题(3)和(4)。

(1) 干扰素基因可从人体T细胞中直接提取,再利用PCR技术进行扩增,在PCR反应体系中一般需要加入Mg2+的原因是。酵母菌或大肠杆菌都可作受体细胞,但上述过程最好选用(填“酵母菌”或“大肠杆菌”),理由是
(2) 携带干扰素基因的重组质粒要用Ca2+处理,使细胞处于;干扰素基因在受体细胞中也能合成人体所需的干扰素,说明生物界中的几乎所有生物
(3) 在血清白蛋白基因的表达载体中,必须有乳腺蛋白基因的启动子,原因是。为获得符合生产要求的转基因牛,最常用的方法是利用法将血清白蛋白基因导入牛的受精卵。
(4) 在牛胚胎移植前,需要对胚胎进行性别鉴定吗?请回答并说明理由:
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 胚胎移植; 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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1. 非洲猪瘟病毒(ASFV)可感染家猪及野猪,病死率高达100%。抗原蛋白的选择和单克隆抗体的制备是相关疫苗研发的基础。CP312R是ASFV中最具免疫原性的蛋白之一。我国学者利用基因工程和细胞融合技术,成功制备了CP312R蛋白和相应单克隆抗体。

请回答:

(1) 获取目的基因。通过访问互联网,检索获得CP312R蛋白基因序列,采用法合成目的基因。
(2) 设计引物与扩增目的基因。

根据目的基因序列,设计和合成引物。据下表分析,引物1、引物2上分别添加了限制酶识别序列。

限制酶及识别序列

引物名称及序列(5'+3')

EcoRI

5'GAATTC3'

引物1:CTAGTCTAGAATGACTACCCACATCTTCCACCCTG

PstI

5'CTGCAG3'

引物2:AAACTGCAGTTAGTGGTGATGGTGGT

GGTGGTGGTGAGCGATAGCGATTTG

XbaI

5'TCTAGA3'

PCR扩增时,应选耐高温的聚合酶。

A.以DNA为模板的RNA                    B.以RNA为模板的RNA

C.以DNA为模板的DNA                    D.以RNA为模板的DNA

(3) 重组质粒的构建与鉴定。

经两种限制酶切割后的目的基因和质粒在DNA连接酶的作用下通过键连接起来,能正确表示这个过程的图像是(填写序号)。

重组质粒经双酶切、电泳分离后,若电泳结果出现个条带表明重组质粒构建成功。电泳时,琼脂糖凝胶作为介质起到的作用,起到电泳指示剂的作用。若电泳时指示剂过早迁移出凝胶,下列调整措施合理有哪些?

A.调整电泳的时间                           

B.调整指示剂上样量

C.调整加样孔朝向正极                    

D.调整电泳仪电压和温度

E.调整凝胶中琼脂糖的浓度

(4) CP312R蛋白与单克隆抗体的制备。

利用基因工程制备的CP312R蛋白作为,刺激小鼠使其发生免疫反应;诱导从小鼠脾脏分离的与骨髓瘤细胞融合;融合得到的杂交瘤细胞必需经过,才能获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞。与体外培养获得单克隆抗体相比,从小鼠腹水中提取单抗的优点是。(答出2点即可)

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