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1. 杨梅营养价值高，但其鲜果不耐储存，以新鲜杨梅酿制的杨梅酒具有开胃消食、利尿排毒等多种功效。杨梅酒的品质很大程度上取决于所选择的酵母性能。科研人员为挖掘杨梅主产区的酵母资源，筛选出酒精转化率高、酒精耐受力强的优质杨梅酿酒酵母，进行如图所示的研究。请回答下列问题：

   

(1) 过程②需充分振荡的主要目的是。与过程②所用培养基相比，过程③所用培养基中还添加了（成分）。
(2) 过程③所用接种工具是。过程④的划线顺序是。如果划线区域c上几乎无菌落生长，原因可能是。
(3) 分离获得的酵母菌还需经过多级筛选才能获得理想菌株。科研人员利用DY5、RY1、JW14 三种菌株分别发酵制作杨梅酒（如图），并进行酒精耐受性检测，结果如下表：

   

菌株名称

酒精度/%

总糖/ g·L-¹

总酸/g·L-¹

DY5

7.0

34.23

12.045

RY1

9.0

15.01

12.675

JW14

6.5

33.64

12.099

杨梅汁

—

78.80

10.737

根据上述结果分析：三种菌株中，最适于杨梅酒发酵的是，判断依据是。
【考点】
微生物的分离和培养;
【答案】

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综合题 普通
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1. 基于健康生活的理念，某公司研发一款高效抑菌洗手液，科研人员检测了甲、乙两种抑菌物质对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果。请回答：
(1) 可用法 将两种菌液分别接种在培养基上，使微生物均匀分布在平板上，该接种方法还可以用来计数，但统计的菌落数往往比活菌的实际数目（填“多”或“少”），原因是。
(2) 先用甲、乙抑苗物质分别浸泡茌干无的圆纸片，后将浸泡的无菌圆纸片放入核种了细菌的平板表面，再将平板置于恒温培养箱培养，一段时间后， 测量抑菌圆直径并求平均值，结果如下表所示：

抑菌物质处理后形成的抑菌圈直径/mm

甲

乙

大肠杆菌

17.0

32.5

金黄色葡萄球菌

21.6

27.0

根据实验结果分析，抑菌物质的效果地好。
(3) 为使实验更具说服力，设置对照组的思路是；；每个实验组至少做三个平板，目的是。
(4) 若要进一步探究抑菌物质在洗手液中的最佳添加浓度，该探究过程的基本思路是。
综合题 普通
2. 回答下列（1）、（2）小题：
(1) 回答生物技术实践的相关问题：

①醋酸菌如果在充足、氧气充足的情况下，可以直接将葡萄糖变成醋酸；由于醋化醋杆菌不能直接利用淀粉等多糖类，所以，淀粉需要过程才能用来制醋，为了提高产量，往往筛选高产菌株，筛选出的高产菌株使用（工具）接种到上，放置于4 ℃的冰箱内进行保存备用。在酿醋前，将菌种放在锥形瓶内进行震荡培养，可用进行搅拌；

②植物的组织培养是快速繁殖的一种方法，将剪下的部分枝条先放在发芽培养基中培养，使之长出更多的，再进行培养后移入生根培养基中，待生根后，将幼苗移至中进行锻炼
(2) 已知拟南芥植物多次培养后依然具有全能性，常用拟南芥进行多方面的研究和应用，原生质体培养就是常用的技术之一，

①原生质体的制备：选取生长到3-4周的拟南芥叶片，先用70%的酒精消毒后，用冲洗5次，将叶片切成0.5-1mm的小片放置于盛有的培养皿中，另取一培养皿，加入灭菌后的酶液，将叶片放入酶液，震荡酶解3小时，酶解后过滤出大组织块，滤液中是酶和原生质体混合物，将滤液可以通过方法进行分离。影响原生质体纯度的因素有（写2种）

②筛选出具有活性的原生质体，可将处理后的目的基因通过法导入到受体细胞，原生质体只有再生出后才能进行细胞增殖，拟南芥的全能性的表达程度主要取决于该植物的。
综合题 普通
3. 回答下列（一）、（二）小题：
(1) 回答与固定化酵母细胞和去除废水中苯酚有关的问题：

Ⅰ.最适于酵母菌生长的是麦芽汁培养基，该培养基在压力（121℃）条件下高压蒸汽灭菌15分钟。待灭菌完毕将试管靠在平放的笔上，进行冷却，待试管中的培养基冷却凝固成后，即可进行接种。

Ⅱ.作为固定化的介质时，海藻酸钠具有良好的韧性，但机械强度较差；而聚乙烯醇具有良好的机械强度，但韧性较差。因此对酵母细胞固定化的介质选择的最佳措施为。固定化酵母的最大优点是，使连续发酵和连续生产成为一种可能。

Ⅲ.将不同质量分数组合的固定化小球，放入初始苯酚浓度为1400mg／L的模拟废水中进行降酚处理，设定处理时间为72h，按的大小判断其降酚能力的大小。

Ⅳ.测定模拟废水中苯酚量的原理是在pH=10左右时，在铁氰化钾的作用下与4-氨基安替吡啉作用生成橙红色的吲哚酚安替吡啉染料，它的水溶液在510nm波长处有最大的。若环境条件适宜的情况下测得样品溶液的该值太大影响数据有效性，则应该。
(2) 回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题。

piggyBac转座系统是一种目前常用的哺乳动物基因工程的研究工具，用于癌基因发现、转基因动物制备、体内基因转移以及体外细胞的基因修饰等。

Ⅰ.研究发现已分化的成熟细胞可以在c-Myc、KLF4、Oct4和Sox2等多因子的刺激下诱导成为细胞，其中胚胎干细胞具有相对未分化、和二倍体核型的特点。而piggyBac转座系统则能够将同时携带这4种调控因子基因的载体插入到染色体上并进行，也可以利用piggyBac转座系统的精确删除功能，将诱导形成细胞的从基因组中删除，实现细胞治疗前后基因组成的一致性。

Ⅱ.通过piggyBac转座系统修饰获得大鼠iPSCs（诱导形成的干细胞），将该细胞的细胞核移植到用紫外线破坏细胞核的卵细胞中获得，先通过、再经、最后胚胎移植从而获得转基因动物。
综合题 普通