B淋巴细胞癌可由疱疹病毒（EBV）侵染B淋巴细胞或其他多种因素引发。请回答下列问题：

1. B淋巴细胞癌可由疱疹病毒（EBV）侵染B淋巴细胞或其他多种因素引发。请回答下列问题：

(1) 在EBV侵入人体后，一些病毒会被吞噬细胞吞噬、消化，这属于免疫系统的第道防线；一些病毒会入侵B细胞；还有一些病毒被摄取后，将其抗原处理、呈递给辅助性T细胞。

(2) EBV侵染B细胞后，会诱导合成病毒L蛋白，一部分L蛋白会出现在B细胞膜上。为研究L蛋白的作用，研究人员构建了B细胞过量表达L蛋白的模型鼠，6周后检测正常鼠和模型鼠的免疫细胞，结果如图1、图2。

根据图1和图2结果推测，L蛋白可激活细胞免疫，以清除过量表达L蛋白的B细胞，支持该推测的证据是。

(3) 肿瘤相关抗原（TAA）是肿瘤细胞上存在的一类抗原分子，可被T细胞识别。L蛋白过量表达可引发B细胞表面TAA含量增加。而非EBV感染引起的B淋巴癌细胞（L-细胞）TAA水平低，难以有效激活T细胞。基于上述研究，为探究非EBV感染引起的B淋巴癌的治疗方法，研究人员以接种了L-细胞致瘤的小鼠为实验材料，进行了以下实验，实验处理及结果如下图。

注：将L蛋白过表达载体导入L-细胞获得L⁺细胞，将L⁺细胞与T细胞共同培养，获得被特异性激活的T细胞称为P-T细胞。

结合免疫学相关原理，解释图中P-T细胞治疗效果明显的原因：。

(4) 抗原呈递时，TAA可与MⅠ或MⅡ蛋白形成复合物转运至细胞表面，从而被T细胞识别。研究人员设计实验以探究P-T细胞通过识别哪种复合物杀伤B淋巴癌细胞，下表为该实验的部分内容。

组别	靶细胞类型	添加抗体类型	检测指标
实验组1	L-细胞	MI蛋白的抗体	肿瘤细胞死亡率
实验组2	①	MⅡ蛋白的抗体
对照组	②	③

请从下列选项中选择合适内容，将字母填入表格①～③处。

A．L-细胞 B．正常B细胞 C．无关抗体 D．MI蛋白的抗体 E．MⅡ蛋白的抗体

若结果显示实验组1的检测指标显著低于实验组2和对照组，则说明。

【考点】

基因工程的操作程序（详细）; 非特异性免疫; 体液免疫与细胞免疫的协调配合;

【答案】

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实验探究题困难

1. 圆红冬孢酵母是可积累油脂的一种微生物，在适当条件下可积累超过菌体干重70%的油脂，该过程需要NAD⁺（氧化型辅酶Ⅰ）、NADP⁺（氧化型辅酶Ⅱ）等参与。科研人员对圆红冬孢酵母进行改造，以建立基于非天然辅酶NCD的调控体系来提高油脂产量。

(1) 圆红冬孢酵母可利用多种廉价的源作为营养物质来生长。细胞内的NADP⁺/NADPH是很多氧化还原反应的铺酶，而NADPH在光合作用中的作用是。

(2) URA3为乳清苷-5-磷酸脱羧酶基因，其控制合成的酶能将5氟乳清酸转化为5-氟尿嘧啶，使细胞中毒死亡。酵母菌中不存在NCD，将大肠杆菌来源的NCD合成酶基因（NcdS）进行改造，获得目的基因NcdS。欲借助重组载体的标记基因URA3筛选含NcdS的酵母菌，写出筛选思路及筛选获得目标菌时的实验结果。

(3) 获得工程菌后，体外检测工程菌产生的NcdS酶活性。检测原理见下图。

注：Mae*和PES是酶

据图分析，在检测体系中限定最终检测产物生成速率的是（在“甲、乙、丙”中选择），并根据上述检测原理说明判断理由：。

(4) 检测结果表明改造后的工程菌可合成大量NCD，但未能提高油脂产量。请提出对工程菌进一步改造的方向：。

实验探究题普通

2. 温度是影响微生物生长的重要因素，科研人员应用基因工程以实现通过温度控制工程菌合成所需物质。

(1) 大肠杆菌是一种常见的微生物，常被改造为基因工程菌，其原因包括（写出2点）。

(2) 为实现温度控制工程菌合成所需物质，科研人员设计了以下方案，构建表达载体（见图1），将其导入大肠杆菌，获得转基因工程菌。大肠杆菌在30℃和37℃均可生长和繁殖，当培养温度为30℃时，C基因编码的C蛋白形成二聚体，因而大肠杆菌表达荧光蛋白。

(3) 为检测该方案，科研人员将该方案中的工程菌稀释涂布在固体培养基上，形成单菌落，培养温度周期控制见图2。依据方案，每个菌落生长2天后可出现4个不同的荧光环带（环带4形成时间为34-48h，环带3形成时间为24-48h，环带2形成时间为10-48h，环带1形成时间为0-48h）。请预测图3所示菌落每个环带的工程菌中荧光蛋白表达情况，在下面表格中按时间顺序，依次写出所表达荧光蛋白的颜色。

菌落环带	1	2	3	4
所表达荧光蛋白的颜色		绿、红、绿

(4) 聚羟基脂肪酸酯（PHA）常用于制备可降解的塑料包装材料。PHA是一种生物大分子，可由单体分子3HB和4HB随机聚合，或通过分段聚合形成嵌段共聚物（图4），其中嵌段共聚物性能更优。共聚物的合成过程如图4。请完善以下表格，通过改造上述方案以实现应用工程菌大规模生产优质PHA（不考虑各种酶在不同温度下的活性差异）。

操作	目的
对上述方案表达载体的改造为：①，并加入持续表达启动子连接的②基因。将构建好的表达载体导入大肠杆菌，获得工程菌。	获得可以合成PHA的工程菌。
以③为原料配置培养基，灭菌后加入上述工程菌。	配制培养基、接种。
控制发酵条件：30℃发酵12小时，随后切换至37℃发酵36小时。	发酵48小时，获得3HB 比例为④的嵌段共聚物。

实验探究题困难

3. 构建基因表达载体时，将动物E蛋白基因插入质粒pUC18的Amp^R内部，以期培育工程菌生成动物E蛋白。构建重组质粒及限制酶的识别序列如图所示。回答下列问题：

注：tetR为四环素抗性基因、Amp^R为氨苄青霉素抗性基因。

(1) 构建基因表达载体时，用限制酶EcoRV和PstⅠ切割质粒pUC18和含E蛋白基因的DNA片段后，选用（选“E.coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）进行连接。将重组质粒pUC20导入大肠杆菌前，先用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是。

(2) 原核生物编码蛋白质时偏好使用GTG编码起始密码子，而真核生物偏好使用ATG。为驱动受体大肠杆菌E蛋白基因的高效表达，对E蛋白基因模板链3^'端的引物进行的改造，并优化E蛋白基因上游的序列以驱动转录。

(3) 初步获得的细菌含有质粒pUC18或质粒pUC20。为筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，配制A~C三种选择培养基进行初筛，结果如表所示：

培养基	抗生素种类	菌落类型
A	四环素	甲
B	氨苄青霉素	乙
C	四环素+氨苄青霉素	丙

根据初筛结果，为获得目的菌，需从菌落类型中挑选多个单菌落分别接种到选择培养基进一步筛选。实验的思路和预期结果及结论：。

实验探究题普通