酵母菌的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母菌可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母菌，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题：

1. 酵母菌的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母菌可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母菌，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题：

(1) 配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的，并进行灭菌，然后及时。

(2) 取步骤②中不同梯度的稀释液加到标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度

约 (填“25℃”“50℃”或“80℃”)的培养基倒入培养皿混匀，选此温度的原因为：。冷凝后倒置培养，倒置培养的目的为：。

(3) 挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述不合理的

有。

a. 为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落

c. 挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母菌细胞中甲醇的含量

d. 可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株

(4) 步骤⑤中为使酵母菌数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和供应。为监测酵母菌的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计色细胞的个数。

【考点】

微生物的分离和培养; 灭菌技术; 培养基的制备; 其他微生物的分离与计数;

【答案】

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实验探究题普通

1. 青枯病由青枯菌引发，严重危害番茄生长。菜粕有机肥是以油菜籽榨油后的副产物为原料经微生物降解而制成的有机肥。研究人员希望筛选出能充分利用菜粕有机肥且抑制青枯菌的菌株。

(1) 菜粕有机肥含有大量的营养物质，可为抑菌微生物的生长和繁殖提供充足的碳源和源。

(2) 为筛选适于在菜粕上生长且能抑制青枯菌的菌株，研究人员进行了下列实验。

①称取10克番茄根际土壤置于装有的锥形瓶，制成稀释10倍的土壤稀释液，接种于若干个含菜粕的固体培养基，30℃培养2~4天，该培养基按功能划分，属于培养基。

②将上述培养基上生长的所有单菌落接种到同一个固体培养基上，培养24h后，在培养基表面均匀喷洒悬液，30℃培养48h后对出现抑菌圈的菌落进行测量，计算每个菌落直径和抑菌圈直径比值以代表，最终筛选出菌株RC14。

(3) 为检测在施用不同肥料条件下菌株RC14对番茄青枯病的防治效果，研究人员将盆栽番茄接种青枯菌7天后进行如下处理，45天后测定发病率，结果如下表所示。

组别	处理	发病率(%)
1	施用常规化肥	72.5
2	A________	62.5
3	施用含菌株RC14的常规化肥	56.5
4	施用含菌株RC14 的菜粕有机肥	17.5

表中A处的处理为，根据表中信息推测第 4 组发病率最低的原因。

(4) 请提出一个 RC14菌抑制青枯菌方式的假设。

实验探究题普通

2. 假结核耶尔森氏菌分泌的tcel蛋白、tcil蛋白使其在与大肠杆菌等细菌的竞争中占据优势，研究人员利用野生型假结核耶尔森氏菌及其不同缺失突变体进行了实验：将微孔滤膜（细菌不能通过，蛋白质等物质能通过）放置在固体培养基表面，然后在滤膜上滴加一种菌液（下层菌），再放第二张滤膜并在其上滴加等量另一种菌液（上层菌），适宜条件下培养后，将两张滤膜上的菌体刮下计数，计算上层菌与下层菌数量的比值，得到图示结果。回答下列问题：

(1) 实验中的培养皿、培养基等需要进行灭菌处理，其中对培养基常用法，对培养皿一般不用该方法，原因是。

(2) 题干中相当于接种的操作是，该过程需要用到下列哪种工具？。

①接种环 ②涂布器 ③微量移液器

(3) 计数上、下层活菌的数量常采用法。

(4) 请根据实验结果，完善解释“野生型假结核耶尔森氏菌在与其他细菌的竞争中占据优势”的假说：野生型菌分泌的蛋白有毒性，会抑制其他细菌，同时分泌的另一种蛋白能以免自身损伤。

实验探究题困难

3. 经人工诱变后，部分细菌由于某种酶被破坏，其细胞中某些化学反应不能正常进行，就形成了营养缺陷型菌株，这在工业生产上有较广阔的应用前景。以下是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程，请回答下列问题：

(1) 制备如图所示的培养基除含有细菌必需的水、碳源、等营养物质外，还需要加入。

(2) 倒平板的适宜温度是50℃左右，待平板冷凝后，要将平板倒置，这样做的目的是。

(3) 根据用途分类，图中基本培养基属于（填“选择”或“鉴别”）培养基。

(4) 进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至（填“基本”或“完全”）培养基上，原因是。

(5) 利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取（填“菌落A”或“菌落B”）进行接种培养，并进一步鉴定。

(6) 科研人员用放射线处理目的菌获得两个突变株C和D，然后对突变株C和D进行实验，结果如表所示。

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
C	不生长	添加营养物质甲，能生长
D	不生长	添加营养物质乙，能生长
C+D	能生长	不添加营养物质甲、乙，都能生长

①突变株C不能在一般培养基上生长的原因最可能是。

②将突变株C和D混合在一起，接种于一般培养基上，都能生长的最可能的原因是。

实验探究题普通