1.
天然微生物来源的内切葡聚糖酶产量低，极大地制约了其生产和应用。内切葡聚糖酶高效异源表达是解决这一问题的有效途径。科研人员从绿色木霉中获得了纤维素内切葡聚糖酶基因EgⅢ，并将其导入毕赤酵母中，成功构建了工程菌（如图），实现了高效降解固体废物中纤维素的目的。
回答下列问题：
(1)
在构建基因表达载体时，应选择的限制酶是，以避免目的基因与质粒反向连接。启动子通常具有物种及组织特异性，应选择来源于的启动子。
(2)
将重组质粒导入大肠杆菌的目的是，此外还可查询并设计引物，提取绿色木霉为模板，采用逆转录PCR技术达到此目的。筛选含有重组质粒的大肠杆菌应使用的抗生素是，理由是。
(3)
科学家为调整纤维素内切葡聚糖酶的最适pH，欲对酶分子结构进行改造，设计了酶分子的氨基酸序列，进而利用基因工程技术改变EgIII基因中的核苷酸序列，最终显著地改变了该酶的最适pH，这属于工程。
(4)
农作物秸秆富含纤维素，利用纤维素生产燃料乙醇避免了与人争粮的问题，实现了纤维素类固体废物的减量化、无害化和。
【考点】
生物资源的合理利用;
蛋白质工程;
基因工程的操作程序（详细）;