1.
小番茄富含茄红素，有助于抗衰老，备受人们喜爱，但小番茄常因感染灰霉菌易患灰霉病而腐烂，严重影响其产量。最近，育种工作者利用现代工程技术获得了经拟南芥AtMYB12基因（简称A基因）转化的番茄，具有对灰霉病表现抗性的特性。回答下列问题：
(1)
A基因的获得及克隆。拟南芥（2n=10）雌雄同体，闭花授粉。由于基因组小等优点而成为模式植物，也是国际上第1个完成全部基因组序列测定的二倍体高等植物。第1代基因测序用的是双脱氧链终止法，在其核基因组测序时，需要测定个核DNA碱基序列。测序过程的关键是用到4种双脱氧核苷三磷酸（其中五碳糖的3’羟基脱去了O原子，不能与磷酸基团相连接），当特定的双脱氧核苷酸掺入到DNA单链的3’端，该链就，从而确定该位点上的碱基种类。当前研究者可从中检索出A基因的碱基序列。对A基因进行扩增时，需要设计种引物，引物自身的碱基序列不能互补，以防止。
(2)
构建A基因表达载体。对pCAMBIA质粒进行改造，添加了卡那霉素抗性基因和潮霉素抗性基因，位于T-DNA片段内的潮霉素抗性基因的作用是。研究发现B基因能延长小番茄果实储存时间，将获得的B基因与含有的相应载体连接，构建出果实专一表达载体。
(3)
将基因表达载体导入受体细胞。在低温条件下，将含A基因表达载体的溶液与CaCl2处理过的（根据表选择合适菌株填空）农杆菌混合，并进行培养，完成转化和。随后筛选出转化成功的农杆菌。为了提高农杆菌转化番茄植物细胞的成功率，下列措施中可以采用的是哪几项?A．用固体培养基进行培养
B．控制培养时的pH
C．控制共培养的时间
D．采用番茄的原生质体作为受体细胞
农杆菌菌株 | 潮霉素 | 卡那霉素 |
EHA101 | 敏感性 | 抗性 |
LBA4404 | 抗性 | 敏感性 |
(4)
转基因番茄功能鉴定。为了便于检测，研究者将绿色荧光蛋白基因与A基因连接在一起构成了融合基因，其上游含有启动子，下游含有终止子等调控序列，融合基因随T-DNA整合到番茄细胞染色体DNA后会大量表达目标蛋白产物。目标蛋白的含量可直观地通过观察来判定，但是否真正抗灰霉病，常见的做法是。