黑色素细胞癌变导致黑素瘤的形成，黑素瘤患者缺乏合适的治疗手段，因此寻找新的治疗药物十分重要。

1. 黑色素细胞癌变导致黑素瘤的形成，黑素瘤患者缺乏合适的治疗手段，因此寻找新的治疗药物十分重要。

(1) 黑色素细胞癌变后具有的特点，导致肿瘤的迅速生长。

(2) 哌柏西利能够抑制多种人类肿瘤细胞增殖，但对黑素瘤的作用尚不明确，科研人员就其治疗效果展开研究。

①培养人黑素瘤A2058（耐药细胞株）和黑素瘤SK-MEL-5细胞，实验组分别加入一定体积的含不同浓度哌柏西利的培养液，对照组加入，置于细胞培养箱中培养24h，检测细胞存活率（图1）。结果表明，哌柏西利明显抑制SK-MEL-5细胞的增殖，且表现为。

②使用流式细胞仪检测部分SK-MEL-5细胞周期（图2），发现哌柏西利可能导致SK-MEL-5细胞周期阻滞在G₁期，判断依据是。

③研究显示，特异性蛋白调控细胞周期的过程如图3所示。为探究哌柏西利对SK-MEL-5细胞周期的影响机制，检测了相关蛋白的表达水平（图4）。综合分析可知，哌柏西利通过降低Cyclin D1、CDK4和CDK6含量，影响三种蛋白特异性结合，抑制，同时抑制Cip/Kip与蛋白复合体分离，进而阻止分离，导致S期相关基因转录受阻，使SK-MEL-5细胞周期阻滞在G₁期。

(3) 若要利用黑素瘤模型小鼠对哌柏西利的体内抗肿瘤效果及安全性进行检测，可参考的检测指标有（两方面各答1点即可）。

【考点】

癌细胞的主要特征; 细胞癌变的原因;

【答案】

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实验探究题普通

1. 肝癌严重威胁人类健康。科研人员对谷物发酵物（ZGE）对人肝癌细胞（HepG2）的调控机制展开了研究。

(1) 科研人员检测了ZGE处理24h对人肝癌细胞增殖活力的影响，结果如图1。

①对照组的处理是。

②结果显示，30%的ZGE效果较好，原因是。但为了排除ZGE浓度较大引起的变化对细胞增殖的影响，选择10%、20%浓度的ZGE进行后续研究。用流式细胞术对ZGE作用前后的肝癌细胞的细胞周期进行检测，结果如图2，可知期细胞阻滞最多。

(2) EMT是肝癌发生的重要进程，该过程中上皮细胞经过复杂变化获得了间质细胞的特性。

①EC蛋白是上皮细胞膜特有的一种黏附蛋白；而NC蛋白是间质细胞的标志蛋白，能够加剧癌基因的作用。可用技术检测HepG2中二者表达情况，结果如图3。说明ZGE处理后HepG2的EMT进程（填“加剧”或“减弱”）。

②图4为细胞迁移和侵袭测定实验装置，对下室细胞进行染色后计数，结果如图5。结果表明。

(3) 综合以上实验结果，请尝试解释ZGE对肝癌细胞的调控作用。

实验探究题普通

2. 药物X是一种新型抗肿瘤药物，为研究它对肝癌细胞和肺癌细胞的作用效果，研究人员利用相关材料进行实验，获得的结果如下图所示，请回答：

实验材料：培养瓶若干个、动物细胞培养液、肝癌细胞悬浮液、肺癌细胞悬液、CO₂培养箱、药物X、显微镜、血细胞计数板等。（要求与说明：血细胞计数板的具体操作、药物X的剂量不作要求、不考虑加入药物X后的体积变化；实验条件符合要求）

(1) 完善实验思路：

①取12个培养瓶，每组设三个重复，分组如下：

A组：适量且等量的动物细胞培养液+2mL肝癌细胞悬液

B组：；

C组：；

D组：。

②将各培养瓶放入CO₂培养箱培养；

③。

④对实验数据进行处理与分析

(2) 分析结果、得出结论：。

(3) 分析与讨论：

①实验每组设三个重复的目的：。

②实验过程中用血细胞计数板（计数室规格为2mm×2mm×0.1mm，共含25个中格）对细胞进行计数时，将1mL样液稀释200倍，所观察到的计数室中细胞分布如图，则样液中细胞数为个/mL。

③研究表明药物X通过与细胞表面的靶位点（一种糖蛋白）结合来延长细胞增殖的时间，从而有效减缓细胞数量的增长。推测药物X对肺癌细胞和肝癌细胞作用效果不同的原因。

实验探究题困难

3. 生物制剂W和X均能显著抑制癌细胞增殖，且X效果更好。欲研究联合使用两种生物制剂对癌细胞增殖作用的效果，请根据下列材料与用具，完善实验分组和实验思路，预测实验结果并进行分析。

材料与用具：肝癌细胞悬液、培养液、W溶液、X溶液、培养瓶、血细胞计数板、显微镜等。

(求与说明：细胞计数的具体操作过程不作要求；不考虑加入W和X后的体积变化等误差；只进行原代培养且培养条件适宜；各组实验结果均有明显差异）

请回答：

(1) 实验分组：

W组：肝癌细胞悬液+培养液+W溶液

X组：肝癌细胞悬液+培养液+X溶液

C组：肝癌细胞悬液+培养液+ ；

D组：。

(2) 实验思路：。

(3) 结果预测：下表中已填写了1种可能的结果和相应的结论，请添加若干行，并将其他可能的结果和相应结论填入表中。结果用数轴表示，各组癌细胞的数目从左往右依次增加，字母间距大小不作要求。

联合使用生物制剂W和X对肝癌细胞增殖效果实验结果预测及分析表

实验探究题普通