微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题：

1. 微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题：

(1) 已知驯化培养基成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是。依照物理性质划分，驯化培养基属于培养基，其中蛋白胨可提供（至少答两点）。

(2) 用于筛选的样品应来自的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为。

(3) 将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的多个相同培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了3个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、253，测得培养基C中菌落数为1.25×10⁷个/mL，则涂布的菌液Y为mL。该统计数据往往比活菌的实际数目（填“多”或“少”）理由是。

【考点】

微生物的分离和培养; 培养基概述及其分类; 其他微生物的分离与计数;

【答案】

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综合题普通

1. 多菌灵是一种广谱性有机杀菌剂，对多种由真菌引起的作物病害有防治效果，在我国的使用范围广泛，但其残留能引起肝病和染色体畸变。某科研小组从长期受多菌灵污染的土壤中取样，进行了多菌灵降解菌的分离，分离过程如下：

请回答下列有关问题：

(1) “第二步”所用的培养基是以多菌灵为唯一碳源的选择培养基，选择培养基的作用是；“第二步”的目的是。

(2) 与“第二步”所用培养基相比，培养基A中还需要加入的成分是。涂布平板过程中的无菌操作有哪些?(写出两条)。

(3) 对涂布的平板进行培养时，将接种的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温箱中培养，这样操作的目的是。

(4) 若研究人员测得每克土壤样品中有多菌灵降解菌2×10⁶个，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL，且每个平板上的菌落数分别为190个、200个、210个，则土壤样品的稀释倍数为。

综合题普通

2. 乳糖酶缺乏症患者体内乳糖酶的分泌量较少，导致患者无法完全消化母乳或牛乳中的乳糖，从而引起非感染性腹泻。工业化生产无乳糖奶粉时，需用乳糖酶将奶中的乳糖除去。为了提高乳糖酶的产量，科研人员从牧民的奶酪（一种近似固体的发酵牛奶制品）中分离纯化出了能高效生产乳糖酶的酵母菌，下图为流程示意图。请回答下列问题：

(1) 将奶酪悬浮液接种到培养基甲中的目的是。

(2) 若要将培养基甲中的菌液稀释10倍，应进行的操作是。

(3) 将菌液接种到培养基乙所采用的方法是，该过程所用的接种工具是，对该接种工具进行的灭菌操作及注意事项有（写出具体操作流程）。

(4) X-gal是一种无色物质，能被乳糖酶分解为半乳糖和蓝色的溴靛蓝，使菌落呈蓝色。从含X-gal的培养基中挑选目的菌时，挑选的依据是。

(5) 在牛奶中添加适量乳糖酶，以获得无乳糖牛奶，此过程并不会破坏牛奶中的其他营养成分，原因是。

综合题普通

3. 苯酚是含酚工业废水的主要成分，具有致癌、致畸和致突变作用。某污水处理厂检测出要处理的废水中含有较高浓度的苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员欲从淤泥中筛选出能高效降解苯酚的菌株，筛选的主要步骤如下图所示，回答下列问题：

(1) 培养基甲和乙营养成分相同，都要加入作为唯一的碳源，甲中还加入了使其与乙物理性质不同；甲、乙两种培养基按用途划分，均属于培养基。

(2) 将C培养基中的菌液稀释并涂布在平板上，经过一段时间的培养，在平板上长出一些形态、大小和颜色不完全相同的菌落，这说明。涂布平板后，通常要将甲倒置培养，目的是防止。

(3) 用涂布平板法统计苯酚降解菌的数目，为了保证结果准确，应选择菌落数为的平板计数。

(4) 在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的苯酚超过某一浓度时，细菌对苯酚的降解量反而下降，其原因可能是。

综合题普通