W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。

1. W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。

(1) 步骤②和③所代表的操作分别是和。步骤④称为。

(2) 为了实现体外受精需要采集雄性动物的精液，精液保存的方法是。在体外受精前要对精子进行获能处理，其原因是；精子体外获能可采用化学诱导法，诱导精子获能的药物是（答出1点即可）。利用该雄性动物的精子进行体外受精需要发育到一定时期的卵母细胞，因为卵母细胞达到时才具备与精子受精的能力。

(3) 一般来说，在同一动物个体中，乳腺上皮细胞与膀胱上皮细胞的细胞核中染色体DNA所含的遗传信息相同，原因是。

【考点】

胚胎移植; 基因工程的操作程序（详细）; 体外受精; 胚胎的体外培养;

【答案】

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综合题普通

1. 科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，该技术的操作过程如图所示。回答下列问题：

(1) 由过程①获得的A为，将获得的人凝血因子IX基因导入成纤维细胞常用的方法是。

(2) 在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是。培养经过核移植获得的重组细胞的培养基中，除营养物质外，还需要提供（答出2点）等环境条件。

(3) 胚胎移植时，一般选择发育至阶段的胚胎进行移植。

(4) 经培育获得的转基因绵羊除能分泌人凝血因子IX外，其与核供体动物的性状基本相似，但又不完全相同，从遗传物质角度分析，其原因是。

综合题普通

2. 胰岛素是治疗人类糖尿病的特效药，传统生产胰岛素的方法是从动物胰腺中提取。1978年，我国科学家将人胰岛素基因（S）导入大肠杆菌细胞中，构建基因工程菌并进行筛选，使大肠杆菌表达重组人胰岛素，这是我国拥有自主知识产权的基因工程药物，流程如图所示。为防止目的基因与载体质粒反向连接，选用图中MunI和NheI两种限制酶来切割目的基因和质粒，但INS基因的两侧无MunI和NheI两种限制酶的识别序列及切割位点，可在PCR扩增INS基因时增加MunI和NheI两种限制酶的识别序列，以便构建基因表达载体。回答下列问题：

注：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。图中限制酶识别序列及切割位点：EcoRI：G^↓AATTC、MunI：C^↓AATTG、NheI：G^↓CTAGC、XhoI：C^↓TCGAG

(1) 设计引物时需要在引物的（填“3'”或“5'”）端增加相应限制酶的识别序列。

(2) 已知INS基因编码区首端和末端（其中一条链）的序列为5'-AGCCCTCC…（中间核苷酸序列）…GAACCAGC-3'，下列可选用的一对引物是_____（选填字母序号）。 A. 5'-GAATTCAGCCCTCC-3' B. 5'-CAATTGAGCCCTCC-3' C. 5'-GCTAGCGCTGGTTC-3' D. 5'-CTCGAGGAACCAGC-3'

(3) 流程中步骤③将目的基因导入大肠杆菌前，常用处理大肠杆菌细胞，以提高转化率。

(4) 在经步骤③处理后的大肠杆菌中进一步分离筛选出导入重组质粒（含目的基因的质粒）的大肠杆菌，从菌落特征的角度设计一个实验方案进行筛选，要求写出实验思路及预期结果。

综合题困难

3. 国内牛奶制品因为牧草进口成本上涨而涨价的现象引起了人们的关注。紫花苜蓿是一种重要的牧草，某研究团队拟将耐盐基因HLA1导入紫花苜蓿中培育耐盐牧草，具体实验流程如图甲，图乙是载体pCHLA1中T-DNA示意图，已知Basta是一种除草剂。回答下列问题：

(1) 过程②为，是基因工程的核心步骤，此过程需要使用的酶有；过程③常用的方法是．

(2) 为达到培养并筛选的目的，过程④的培养基除了加入植物生长所需的营养物质外，还需加入。

(3) 过程④得到的幼苗（填“一定”或“一定不”或“不一定”）含有HLA1基因，为进一步确认，可用PCR扩增的方法进行鉴定，进行PCR反应所用到的引物应根据设计。

(4) 要检测目的基因是否插入到苜蓿细胞的染色体DNA上，可采用技术。

(5) 判断本实验的目的基因是否表达成功，还应进行实验。

综合题普通