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1. PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：

(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)

(1) 提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是，提取到的DNA可以用试剂鉴定。
(2) DNA扩增：

①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是；不科学的原因是。

                                                                                                                      

基因

引物序列

PO

F-5'GGGATT-3'

R-5'AATCCC-3'

NOS

F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3'

R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'

CP4-EPSPS

F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3'

R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、酶、等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3) 扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与等有关。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; DNA的粗提取和鉴定;
【答案】

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综合题 普通
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1. “实时荧光定量RT-PCR”是新冠疫情防控的一把利刃，通常在1~2h内即可得到检测结果。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针（如图1），其5末端连接荧光基团（R），3末端连接淬灭剂（Q）。当探针完整时，R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中，当Taq酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和Q，R发出的荧光信号被相应仪器检测到，荧光信号的累积与PCR产物数量完全同步（如图2）。请据图回答：       

   

(1) 结合图1和图2分析，“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中通常都应该含有酶、酶、dNTP、Mg2+、缓冲剂系等物质。这种分子层面的荧光RT-PCR检测具有特异性和灵敏性都很高的特点，主要与试剂盒中的、有关。
(2) PCR技术的原理是。根据TaqMan探针功能分析，探针中碱基序列的设计应主要依据。
(3) 根据图1和图2，Taq酶的除了能催化DNA子链的延伸，还能。
综合题 普通
2. 抗虫和耐除草剂玉米双抗12—5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图1所示。回答下列问题：

(1) 步骤①的作用是；步骤③表示，温度应控制在左右。
(2) PCR过程所需的酶是，其作用的化学键为，图1过程1个DNA经循环4次需要引物个。
(3) 在进行PCR扩增时，应选择图2中引物，原因是。
综合题 普通
3. Leigh综合征属于神经变性疾病，是一种亚急性坏死性脑脊髓病，虽然患者罕见但疾病症状严重，幼年即致死。已有研究表明，Leigh 氏综合征患者中20%~25%是由线粒体复合酶Ⅰ基因突变导致。某位母亲约有1/4 的线粒体发生了该突变基因，她的前两个孩子因患有Leigh 氏综合征而夭亡。她的第三个孩子因为接受了另一名女性捐赠的正常基因而成为全球首个“三亲婴儿”，其培育技术路线如下图所示。回答下列问题：

(1) 图中的“去核”操作是去除，整个培育过程所涉及的技术包括(写出两种)。
(2) 某研究小组希望通过PCR 技术对突变基因位点进行改造，并将改造后的基因转入 Leigh 综合征患者的细胞模型，探究线粒体功能能否恢复正常水平，为 Leigh 综合征的基因治疗提供研究基础。

①PCR 的每次循环一般可分为三步，PCR 完成后常采用来鉴定 PCR 产物。

②如图为利用基因定点突变技术，将原有基因C/G替换为 A/T的过程示意图，该过程进行了四次PCR，PCR1选择加入的引物是，PCR4选择加入的引物是。

   

   

③突变基因改造后，科研小组利用慢病毒构建基因表达载体进而转导至 Leigh综合征患者的细胞模型进行培养研究，研究人员可通过检测推测该方法的效果。
综合题 普通