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  • 1. (2023高三上·重庆模拟) DNA分子杂交时,常需要大量的单链DNA探针。不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法,其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物。在PCR反应的早期10-15个循环中,扩增产物主要是双链DNA,当后期数量较少的限制性引物耗尽后,数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA单链。

    1. (1) 若A链为所需的DNA分子探针,则非限制性引物应选用引物;PCR反应缓冲体系中一般要添加以激活耐高温的DNA聚合酶。
    2. (2) 进行最初10-15个循环的目的是。如果体系中原模板DNA的数量为a,最初10次循环产物为双链,后15次循环产物为单链,则最终获得的单链探针数为。因为DNA单链与双链的分子量不同,可通过将单链探针DNA分离出米。
    3. (3) 为精确控制产物生成量,科学家尝试设计了较长的非限制性引物与较短的限制性引物,在进行一定的循环次数后,适当提高复性温度以避免残留限制性引物与模板结合。高复性温度条件下限制性引物不能结合模板链的原因是
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