西花蓟马是一种对农作物危害性极大的害虫，球孢白僵菌是一种常见的虫生真菌。为了获得对西花蓟马高毒力、产孢子（该菌的繁殖体）能力强，且在继代培养过程中毒性较稳定的球孢白僵菌菌株，某研究小组开展了有关实验。回答下列问题：

1. 西花蓟马是一种对农作物危害性极大的害虫，球孢白僵菌是一种常见的虫生真菌。为了获得对西花蓟马高毒力、产孢子（该菌的繁殖体）能力强，且在继代培养过程中毒性较稳定的球孢白僵菌菌株，某研究小组开展了有关实验。回答下列问题：

(1) 欲获得球孢白僵菌，可从体内寻找，再通过毒性实验筛选出对西花蓟马高毒力的菌株。

(2) 将（1）中筛选得到的菌株，接种到CMA培养基（玉米粉20g·L^-1、麦麸10g·L^-1、蛋白胨5g·L^-1、KH₂PO₄3g·L^-1、NH₄NO₃1g·L^-1、MgSO₄·7H₂O 1g·L^-1、琼脂15g·L^-1）上，可筛选出毒力高、产孢子能力强的菌株。该过程中常用的接种方法有。

(3) 从物理性质上看，CMA培养基属于，该培养基中为球孢白僵菌提供碳源的成分有。通常，制备培养基时要根据所培养的微生物种类不同来调节培养基的pH，其原因是。

(4) 为筛选出在继代培养过程中能使球抱白佩菌毒性较稳定的培养基，研究小组将（2）中筛选得到的菌株分别接种到3种培养基CMA、CMA +蝉蜕粉、CMA +西花蓟马尸粉）中，进行继代培养，用各代菌株分别处理西花蓟马，并统计其死亡率，结果如下表。

培养代数	第5天的校正累积死亡率（%）
培养代数	CMA培养基	CMA+蝉蜕粉	CMA+西花蓟马尸粉培养基
1	93.62	89.36	93.62
2	89.36	91.49	93.62
3	74.47	93.62	93.62
4	78.72	93.62	97.87
5	65.96	87.23	93.62

分析表中结果，可得出的结论是。为长期保存筛选得到的球孢白低菌优良菌种，可以采用的方法。

【考点】

微生物的分离和培养;

【答案】

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实验探究题普通

1. VC的传统生产方法是莱氏化学法，这种方法工序复杂、效率低而且伴有大量有毒气体和废弃物的产生。我国发明了二步混菌发酵法生产VC前提。二步混菌发酵法的第一步是利用生黑醋酸杆菌发酵（培养液pH=4~5），第二步是经氧化葡萄糖酸杆菌和假单胞杆菌混合发酵（培养液pH-6.0~7.5），最终将葡萄糖转化为VC前体，然后经内酯化等步骤，VC前提可转化为VC，这种生产VC的方法工序简单，收率高，成本低，安全，对环境污染小。目前，我国发明的二步混菌发酵生产VC的工艺处子世界领先水平。回答下列问题：

(1) 人们按照微生物对的不同需求配制培养基。培养基一般都含有等物质。

(2) 实验室及生产中进行微生物分离和纯化的常用方法是和稀释涂布平板法。稀释涂布平板法还可用于微生物的计数，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是。

(3) 对第一步发酵培养液检测发现几乎没有杂菌存在，推测最可能的原因是。在第二步发酵中区分氧化葡萄糖酸杆菌和假单胞杆菌的方法是，在进行发酵生产时，废弃培养液不能直接排放到外界环境中，原因是。

实验探究题普通

2. 回答与高山兀鹫肠道微生物的分离鉴定与耐药性分析有关的问题：

(1) 细菌的分离与纯化。在无菌条件下，将高山兀鹫粪便样本，放入1 mL无菌水中，3000r /min离心5 min。取100μL，在无菌水中进行10倍梯度稀释，制成10^－1至10^－9梯度稀释液。分别吸取其中的不同梯度稀释液接种在LB琼脂和MRS琼脂培养基（乳酸细菌培养基）上。分别在有氧以及培养环境中，37℃培养24-48 h。然后挑取表征（颜色、大小、形状）不同的于LB肉汤和MRS肉汤中，分别在相应培养环境中37℃培养12 h。

(2) 药敏试验。采用药敏纸片琼脂扩散法，将特定的菌液均匀接种在琼脂培养基上，贴上34种药敏纸片。将贴有药敏纸片的培养基，放入培养箱中37℃培养16 h后测量直径，并依据抗菌药物敏感性试验的技术要求判定结果。以大肠埃希氏菌为质控菌株，若质控菌株的正常，则药敏试验的结果可靠。

(3) 当细菌长期处于含抗生素的生存环境时，在作用下，敏感菌株被抑制或杀灭，而天然耐药或获得性耐药菌株则继续生存、繁殖和克隆传播，进一步导致细菌的耐药性。

实验探究题普通

3. 传统酒曲是用辣蓼草、马鞭草和大米粉等原料制成的，其中含有多种有助于酿酒的微生物，如霉菌、酵母菌等，某同学想研究一种传统酒曲中所含的微生物，现进行下述实验。请回答下列问题。

实验一：将酒曲制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到固体完全培养基上，每个稀释度的酒曲悬液接种三个平板，接种后培养一段时间，统计每个平板的菌落数量，并根据菌落的特征统计分析微生物的类群。

实验二：将酒曲制成悬液稀释到一定的倍数，接种到以淀粉为唯一碳源的培养基上，培养一段时间后，观察透明圈的大小，并从最大的透明圈中央挑取菌落并保存。

(1) 实验一操作过程中所用的接种方法是。培养一段时间后统计发现，每个稀释度的酒曲悬液接种后形成的菌落数量是不相同的，应选择菌落数在个菌落的平板进行统计。该方法统计得到的菌落数比实际的菌落数要偏，原因是。

(2) 实验一操作过程中根据菌落特征鉴别微生物时，能够观察的菌落特征有_______。 A. 形状 B. 颜色 C. 隆起程度 D. 大小

(3) 实验二操作的目的是

(4) 有人说，实验二中形成的菌落并不只是能分解淀粉的菌落，你是否同意他的说法?。请说明你的理由：。

实验探究题普通