下列有关生物工程的叙述，正确的有（）①基因工程的核心步骤是构建基因表达载体②蛋白质工程可通过直接改造蛋白质的结构从而改变其功能③PCR技术需要利用限制酶打开DNA双链④利用核移植技术可以培育试管婴儿⑤植物组织培养过程中，需要用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁⑥利用植物茎尖培养脱毒苗时，需要对离体的茎尖、培养基等进行灭菌⑦利用动物细胞培养技术和细胞融合技术可以制备单克隆抗体⑧植物体细胞杂交技术，能克服远缘杂交不亲和的障碍

1. 利用PCR 获得目的基因后，用限制酶EcoR Ⅰ同时处理目的基因与质粒，拼接后可得到重组基因表达载体，其部分DNA片段如下图所示。下列有关引物的分析正确的是（　　）

A. 通过PCR获取目的基因时，所选的引物可为引物2和引物3 B. 检测目的基因是否插入质粒且方向是否正确时，应选用引物1 和引物4进行PCR C. 若设计的引物与模板不完全配对，可适当提高 PCR 复性的温度 D. DNA聚合酶能与引物结合，并从引物的5'端连接脱氧核苷酸

单选题容易

2. 下列关于DNA的提取和DNA片段的扩增及电泳鉴定的叙述，正确的是（）

A. 最好使用猪血细胞进行DNA粗提取与鉴定实验，因为猪血较容易获得且价格便宜 B. DNA粗提取与鉴定实验中，向提取液中加入二苯胺试剂后即可观察溶液颜色变化 C. PCR实验中使用的微量离心管、枪头和移液器等在使用前都只需进行消毒处理 D. PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，电泳时电泳缓冲液需要没过凝胶

单选题容易

3. 聚合酶链式反应（PCR）能实现对相应核苷酸序列的大量复制，相关叙述正确的是（）

A. 该技术需要用到引物、脱氧核苷酸、解旋酶等 B. 复性是为了使解旋后的两条链恢复双螺旋结构 C. PCR的产物通常用抗原－抗体杂交技术进行鉴定 D. 为激活相应酶，PCR反应缓冲液中需加入Mg²⁺

单选题容易

1. 实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增，下列相关叙述正确的是（）

A. 需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶 B. 反应过程包括变性→复性→延伸 C. 95℃时DNA的磷酸二酯键断开 D. 引物与模板结合后向5’方向延伸

单选题普通

2. 关于PCR技术的叙述，正确的是（）

A. 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B. 用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 C. PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶 D. PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应

单选题普通

3. 荧光定量PCR检测技术可应用于新冠病毒核酸检测。其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针。当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处，会催化水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生（如图），通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数）。下列关于该技术叙述错误的是（　　）

A. PCR反应体系需加入模版、脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶 B. 耐高温的DNA聚合酶可催化形成磷酸二酯键和断开磷酸二酯键 C. 最终监测的荧光强度与起始时反应管内目标DNA含量呈正相关 D. Ct值越大表明检测样本中病毒数目越多，患者的危险性越高

单选题普通

1. 反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述错误的有（　　）

A. 应选择引物1和引物4进行PCR扩增 B. 设计的引物中GC碱基含量越高，退火温度越低 C. PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的环状DNA分子 D. 整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶

多选题普通

2. 基因工程为培育抗病毒植物开辟了新途径，下图为研究人员培育转花叶病毒外壳蛋白基因（CMV-CP基因，长度为740个碱基对）番茄的主要过程示意图(Kan^r为卡那霉素抗性基因)。请回答：

（1）将CMV-CP基因导入番茄细胞后，培育的番茄植株具有抗CMV感染能力，这种现象属于植物的特异性免疫，该免疫过程中抗原是。

（2）过程①接种的农杆菌细胞中，Kan^r及CMV-CP基因应整合在Ti质粒的T-DNA内部，这是由于。使用液体培养基培养农杆菌的目的是。

（3）为确定用于筛选的Kan适宜浓度，研究人员进行实验，结果如右表。最终确定过程③④加入的Kan浓度为35mg·L^-1 ，该浓度既可，又不至于因Kan浓度过高影响导入重组DNA细胞的生长发育。

Kan浓度/mg．L-¹	接种外植体数	形成愈伤组织数	外植体状况
0	55	49	正常形成愈伤组织
25	66	2	只膨大、不易形成愈伤组织
35	66	0	变褐色死亡
50	64	0	变褐色死亡

（4）过程③、④所需的培养基为（填“固体”或“液体”）培养基。过程⑤再生植株抗性鉴定时，引物序列设计的主要依据是，引物序列长度及G+C比例直接影响着PCR过程中（填“变性”或“退火”或“延伸”）的温度。

（5）过程⑤电泳结果如图，其中1号为标准参照，2号为重组Ti质粒的PCR产物，3-6号为抗性植株DNA的PCR产物，可以确定3—6号再生植株中号植株基因组中整合了CMV-CP基因。

综合题普通

3.

t-PA蛋白能降解血栓，是脑血栓患者的特效药，但其促进血栓溶解的特异性不高。经研究发现，若将t-PA蛋白第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，可获得改良的t-PA蛋白，其溶解血栓的效率明显提升。图为改造t-PA蛋白基因及构建表达载体的过程。

（1）下列关于体内DNA复制与PCR技术的叙述正确的是______。

A. 都需要DNA聚合酶	B. 都需要破坏氢键
C. 都遵循碱基互补配对原则	D. 都是边解旋边复制

（2）t-PA蛋白第84位的半胱氨酸对应的基因模板链碱基序列是ACA，图中黑点表示突变位点的碱基，若要得到改良t-PA蛋白，则引物b中该位点的碱基是________。以下关于图中引物描述正确的是________。（编号选填）（注：丝氨酸的密码子是UCU）

①引物b与t-PA基因的编码链互补②引物a和引物d为正常引物③DNA聚合酶都是从引物的 $\text{[math]}$ 端开始延伸DNA链

（3）据图和已学知识分析，为保证质粒pCLY11与t-PA蛋白改良基因高效连接，选用的限制酶是______。

A. XmaⅠ和NheⅠ	B. SmaⅠ和Bg1Ⅱ
C. Bg1Ⅱ和NheⅠ	D. XmaⅠ和Bg1Ⅱ

（4）据图分析，若以大肠杆菌作为受体细胞，经过培养、筛选获得工程菌株，以下关于该过程的描述正确的是______。

A. 培养基中应加入伊红美蓝，便于筛选出大肠杆菌

B. 培养基中应加入新霉素，所选的工程菌菌落应呈白色

C. 培养基中应加入新霉素，所选的工程菌菌落应呈蓝色

D. 培养基需要经过高压蒸汽灭菌，操作过程需要符合无菌技术要求

（5）成功获取工程菌株后，可利用发酵罐大量生产t-PA改良蛋白。发酵过程中需控制的参数是________。（编号选填）

①温度和pH ②溶解氧 ③营养物质浓度 ④搅拌转速

（6）上述改良t-PA蛋白的操作策略属于蛋白质工程中的________（定向进化/定点突变）。

研究发现，运用动物细胞工程可以从转基因牛的乳汁中获得t-PA改良蛋白，具体流程如图所示。

（7）据图和已学知识分析，下列描述正确的是______。

A. 过程①运用了动物细胞核移植技术

B. 过程②通常使用的方法是显微注射

C. 过程④运用了胚胎移植技术，此过程前需进行性别鉴定

D. 为获得更多的卵母细胞，可对母牛注射促性腺激素刺激其超数排卵

综合题困难