1. CRISPR/Cas9基因编辑系统主要包含向导RNA(sgRNA)和Cas9蛋白两部分,sgRNA能特异性识别特定的DNA序列,从而引导Cas9蛋白到相应位置剪切DNA,最终实现对靶基因序列定点编辑,其作用过程如图所示。

   

(1) CRISPR/Cas9系统能精准编辑相关基因的原理是sgRNA与目标DNA发生配对,引导Cas9蛋白催化(填化学键名称)水解、Cas9蛋白对目的基因剪切后,断裂后的DNA分子会进行修复。断口处可能产生碱基错配,从而实现对目的基因的编辑。上述过程发生的变异类型是
(2) sgRNA切割非特异性DNA导致CRISPR/Cas9编辑系统对非目的基因进行编辑的现象称为“脱靶”。研究发现脱靶几率与sgRNA的长度相关。sgRNA的识别序列越(填“长”或“短”),基因编辑的脱靶率越高,原因是
(3) 长期存在于细胞核中的Cas9蛋白也可能产生对非目标DNA的切割,从而造成脱靶,为提高基因编辑的精准性,减少脱靶,科研人员尝试对基因编辑系统进行改造。热纤梭菌中Co和Do蛋白能以高亲和力相互作用,形成复合物。科研人员将Cas9蛋白的N端和C端两个片段分别与Co和Do蛋白融合,构建Cas9(N)-Co复合物和Cas9(C)-Do复合物,这两个复合物在细胞中相遇时可结合成Cas9全酶并恢复活性。科研人员构建图1所示的表达载体,导入受体细胞。

   

启动子1为远红光诱导型启动子,启动子2为持续表达启动子。据此分析,在没有远红光照射时,受体细胞中Cas9(N)、Cas9(C)和Cas9蛋白的存在情况及存在位置是。与持续表达Cas9全酶相比,上述方法的优势是

【考点】
基因突变的特点及意义; 基因工程的基本工具(详细); 基因工程的操作程序(详细);
【答案】

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