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1. 人乳铁蛋白被认为是一种极具开发潜力的食品添加剂，某食品公司欲按照如图所示流程实现人乳铁蛋白的批量生产。图中Tetr为四环素抗性基因，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，三种限制酶BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ的酶切位点已在图中标注。回答下列问题：

(1) 启动子是识别和结合的部位。除启动子外，图中未标出的、载体上一般还具有的元件有。PCR技术可特异性地对人乳铁蛋白基因进行快速扩增，PCR扩增时需要种引物，一般还需要往PCR反应缓冲液中加入Mg2+ ， 其原因是。
(2) 限制酶主要是从生物中分离纯化出来的。图中构建重组载体时，应选用的限制酶是。
(3) 图中①过程可通过的方法将重组载体导入供体牛受精卵中。进行②过程前需要对代孕牛进行的操作是。
(4) 雌性转基因牛进入期后，即可在其乳汁中提取出人乳铁蛋白。该雌性转基因牛与普通雄性个体交配后，所产生的雌性后代不一定能分泌含人乳铁蛋白的乳汁，原因是。
【考点】
PCR技术的基本操作和应用; 胚胎移植; 基因工程的操作程序（详细）;
【答案】

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综合题 普通
能力提升
换一批
1. 诺如病毒是世界范围内诱导急性胃肠炎发生的重要病原体。对诺如病毒的快速准确检测能为诺如病毒胃肠炎疫情的防控提供有力支撑。荧光定量RT-PCR具有灵敏度高、操作简单快捷、不易污染等特点， 如图是利用荧光定量RT-PCR检测诺如病毒的技术流程。回答下列问题：

(1) 步骤①的操作叫作，酶X是。
(2) 图中引物是根据序列设计的，引物的作用是。
(3) 步骤②的目的是，cDNA中G+C的含量越多，②过程需要的温度越高，其原因是。
(4) 荧光定量RT-PCR技术可定量检测样本中某种DNA的含量。其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。荧光强度与PCR产物量成（填“正比”或“反比”）。荧光定量PCR仪能监测出荧光到达预先设定阈值的循环次数（Ct值），诺如病毒核酸浓度越高，Ct值越。
综合题 困难
2. 研究人员从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌（A菌），从A菌中提取一种纤维素酶基因（CBHⅡ）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体pUT质粒（图1）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。回答下列问题：
(1) 采用PCR技术扩增CBHⅡ基因时需要根据设计引物，每一轮扩增耐高温的DNA聚合酶都从子链的（填“3'”或“5'”）端将子链延伸。
(2) 图1中pUT质粒上的高效表达启动子的作用是，CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点（有关限制酶的识别序列和酶切位点如上表所示）才能与pUT质粒连接，因此在扩增CBHⅡ基因时，需要在两种引物上分别添加序列和序列。
(3) 为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入A菌，并将其接种在含的培养基上培养，然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳，结果如图2所示。据图分析，菌落中成功导入了重组质粒，理由是。
综合题 普通
3. 研究人员从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌（A菌），从A菌中提取一种纤维素酶基因（CBHⅡ）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体pUT质粒（图1）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。回答下列问题：

(1) 采用PCR技术扩增CBHⅡ基因时需要根据设计引物，每一轮扩增耐高温的DNA聚合酶都从子链的（填“3'”或“5'”）端将子链延伸。
(2) 图1中pUT质粒上的高效表达启动子的作用是，CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点（有关限制酶的识别序列和酶切位点如上表所示）才能与pUT质粒连接，因此在扩增CBHⅡ基因时，需要在两种引物上分别添加序列和序列。
(3) 为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入A菌，并将其接种在含的培养基上培养，然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳，结果如图2所示。据图分析，菌落中成功导入了重组质粒，理由是。
综合题 普通